微生物实验总结范文

推荐第1篇：微生物实验总结

食品卫生综合检验试验总结

食品质量091金秀建2009016521

为期五天（2012年6月11日-15日）的食品卫生综合检测实验已经告一段落了，在这一周的微生物实验主要包括牛奶中大肠菌群的计数、鸡蛋中沙门氏菌的检验和牛奶中金黄色葡萄球菌的检验三个实验，经过三个综合实验的课程，能让我更能理解试验时要掌握的细节，也要保持头脑的时刻清醒。同时让我对这三种微生物有了更进一步的认识，同时让我也对实验也更加熟悉了。

首先我们做的是大肠菌群的计数，它是采用MPN（最大可能数法）的计数来测定的。大肠菌群的特性为：在37℃，24小时内能发酵乳糖，产酸、产气，好氧或兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌，一般认为该菌群细菌可包括大肠埃希氏菌、柠檬酸杆菌、产气克雷白氏菌和阴沟肠杆菌等。其检测原理为细菌在样品内的分布是随机的，所以检测细菌时，可按概率理论计算菌数。大肠菌群MPN计数的检验程序为样品的稀释、初发酵试验、复发酵试验和最后的大肠菌群最可能数(MPN)的报告。那么在第一天的上午，老师基本给我们讲了实验的原理和步骤，以及一些需要注意的地方，我们便开始计算自己需要配制的实验试剂的量，并且称取试剂的量和清洗所要用的实验器皿，首先配置的是生理盐水和LST肉汤，并且把生理盐水和LST肉汤分装到试管内，盖好盖子包扎好进行灭菌，灭完菌也就到了吃饭时间，等下午来接种培养了。

牛奶样品与生理盐水以1:9的比例进行混合，摇匀后做10倍系列的稀释，做了3个稀释度。随后将三个稀释度的样品匀液以每个稀释度3支试管接种到内装小导管的含LST肉汤的试管中，最后放入恒温培养箱中培养24h。在经过24h的培养后，所有的试管内均产生气体，而后我们要将培养后的有菌落的LST肉汤接种到BGLB肉汤试管中进行培养24-48h，观察后发现所有的BGLB管都产气，颜色也有原来的绿色变成暗黄色，证明也产生了酸，所以记为所有产气管为大肠菌群阳性管。最后查MPN表可得出每毫升样品中大肠菌群的MPN为大于等于1100ml/MPN。

我们小组在做大肠菌群测定还是很顺利的，中途没有出现什么错误，实验很顺利，小组成员的配合和分工也都很好。

第二个实验是鸡蛋中的沙门氏菌的检测，他的特性是：沙门氏菌需氧或兼性

厌氧，10-42℃都可生长，最适温度为37℃，大部分可发酵葡萄糖，产酸产气，是革兰氏阴性的无芽孢杆菌。在营养琼脂平板上生长产生光滑，湿润，半透明，边缘整齐的菌落。在血平板上产生透明溶血环，形成大小中等的灰白色菌落。实验过程可分为前增菌、选择性增菌、选择性平板分离、生物化学筛选四个阶段。

实验首先配制BPW溶液，进行分装和高压灭菌，在无菌条件下，移取5ml鸡蛋液样品于盛有45mlBPW的组织培养瓶中，混匀，放置于36℃±1℃的恒温培养箱中培养24h±2h，观察生长现象。接下来的增菌阶段，需要配制TTB增菌液和SC增菌液，移取1ml的前增菌液接种到10mlTTB增菌液内，在恒温培养箱内培养18h～24h，SC增菌液过程与TTB一样。接下来需要制备BS平板和HE平板，等平板凝固后便可以开始接种了，是采用平板分多区划线的方法，然后放在37度温箱培养18~24h。最后要进行生化实验，要先配制三糖铁琼脂，从培养皿的平板上挑取可疑菌落，接种到三糖铁琼脂，先与底层穿刺，再在斜面划线。同时把菌落接种到各种生化试剂里，封口后一起放入恒温培养箱培养18h。取出培养皿和生化小试管观察结果，记录。

第三个实验是金黄色葡萄球菌的检验，它的特性一般是无芽孢，鞭毛。大多数无荚膜，革兰氏染色阳性，它培养的营养要求不高，在普通培养基上就能生长良好，需氧或兼性厌氧。在血平板上培养会使红细胞破裂，形成透明的溶血环。在显微镜下可以看到是紫色的，排列成葡萄状的圆形的菌。

首先是样品的处理，称取22g7.5%氯化钠肉汤溶解于250ml水中，在每个均质瓶内移取45ml，同时制取Baird-Parker培养基，高压灭菌后吸取牛奶样品5ml到均质瓶内。放入恒温箱培养18-24h。然后用接种环取培养物分别划线接种到Baird-Parker平板和血平板上，培养18-24h， Baird-Parker平板有可能需要培养45-48h。最后进行血浆凝固酶试验，挑取BP平板或血平板上可疑菌落1个或以上，分别接种到5ml左右BHI肉汤中，36±1℃培养18-24h。取新鲜兔血浆0.5ml，加入BHI培养物0.2-0.3ml，振荡摇匀，置36±1℃温箱培养，半小时观察一次，6小时观察，直至出现凝固，判为阳性结果。也有小组6h后也没凝固的，则判为阴性。最后进行革兰氏染色实验，观察细菌的形态特征。最后记录结果。

三个实验虽然不多，但是三个实验的跨度刚好是一个星期，所以我们实验刚

好可以做完，实验从刚开始的懵懂到慢慢的熟悉，到最后的成功，少不了的是小组合作和老师的帮助。经过三个微生物的实验，让我对微生物实验的过程。不过对于微生物的实验一定要细心，一个是它需要的时间很长，要灭菌和培养，如果做错都得重新再来，并且实验过程中不能被污染，否则会对实验结果造成一定的污染或完全不可用。对实验流程一定要熟悉，现象一定要观察仔细，因为类似的菌类有很多，其生产的习性也类似，若不观察仔细，就会有结果的偏差。我们小组的实验都很顺利，中途虽有一点点过失，但对实验的进度和结果没有什么大的影响，实验结果也是让我们蛮有成就感的，感谢小组的配合。操作不像理论，只有多次练习才有体会，在今后的实验中，我会更加努力。

推荐第2篇：微生物实验总结

微生物实验总结

姓名:赵叶锋班级：食品科学113学号：2011013522

大三的第二学期块结束了，这个学期操作了四个微生物实验，以及一个自主设计性实验。通过前阶段对四个实验的操作和认知的基础上，展开第五个实验的自主设计。实验分别是菌落总数测定，霉菌和酵母的检查和计数，乳酸菌的检验，微生物药敏试验以及探讨环境因素对微生物生长的影响。

这学期的微生物实验是在上学期微生物实验的基础上的累积和扩展延伸：以培养基的制备与灭菌，玻璃器皿的洗涤、包扎和灭菌，微生物接种技术和细菌的革兰氏染色为技术基础进行的，以加强学生基础理论知识和基本技能的培养为目的。

下面我来谈谈我在实验中的心得体会。

第一个实验是菌落总数测定。让我重新认识了一下这个名词：菌落形成单位，我现在的理解就是：1ml或者1g待测样品中菌落的个数，一定要注意的是单位是CFU/ml或CFU/g。还有就是要掌握好对高压蒸汽灭菌锅的操作。实验之前要充分做好预习工作，以便实验的进行。由于是测定微生物实验，就要尤其小心其他杂菌的混入影响实验结果。因此要做好实验仪器和各种试剂的灭菌，有培养皿，试管，移液枪头（装在盒子中），按要求配置好的琼脂培养基和生理盐水，按各自要求用纱布和报纸包扎好，送入高压蒸汽灭菌锅进行灭菌。玻璃仪器在包扎前要进行清洗，并烘干，以免水分沾湿报纸。灭完菌后取出物品进入超净工作台，超近工作台的紫外灯在进入20分钟前开启，并在进入时关闭，以免影响人体。要对台面进行消毒处理，用酒精擦拭。可以在等待琼脂培养基冷却到50摄氏度左右前对待测样品进行10倍系列稀释至需要的浓度。要注意的是一定要标记好浓度或者按顺序排列在试管架上以免弄混，同一个试管里吸取样品才能用同一个枪头进行移液。再进行平板接种。待琼脂培养基冷却好后，用右手打开纱布并将锥形瓶拿住，将瓶口靠近酒精灯再进行灭菌，左手拿培养皿用大拇指和食指稍微打开培养皿盖，将琼脂培养基倒入培养皿中心内，不用倒很多，使琼脂培养基没过培养皿表面即可。培养皿一定是平拿在手上的，倒好后轻轻盖上培养皿盖，缓慢地平方在超净工作台台面边缘处，再推至中间。再用移液枪取1ml样品快速打入培养皿中央，盖上培养皿盖，然后用手轻轻摇晃，千外不要太大力。然后贴上标签记号，静置。如此依次操作下去。静置一段时间待培养基凝固后倒置放入恒温培养箱培养一段时间再取出进行观察计数。

我们组的实验结果不甚理想，培养皿中的微生物都是连成一片的，或者是培养皿壁上也都长着，主要是由于待测样品打入培养皿后，摇晃不均匀或者太大力了，以至于菌液没分散开来或是跑到培养皿壁上去了。

第五个实验是自主设计实验环境因素对微生物生长的影响。选取3个环境因素物理、化学和生物因素均可进行设计。根据前四个实验的基础，通过小组探讨和交流设计出实验方案。并加以验证。通过自主设计实验可以结合小组的智慧，加强团队协作精神和创新思维，通过实验可以验证理论，增加感性认识，培养独立工作能力和思考能力，并使具有过硬的专业技术水平。

通过这次的实验，我明白了任何事情丢不是一蹴而就的，而是一个慢慢积累的过程。虽然实验结果不是很理想，但是我参与了过程，通过小组讨论我们也分析了失败的原因，找到了解决的方法，避免了下一次失误。并且从中理解了团队讨论和合作的重要性。以上即是我的全部感想。

推荐第3篇：微生物实验个人总结

微生物实验总结

这个学期操作了四个微生物实验，以及一个自主设计性实验。通过前阶段对四个实验的操作和认知的基础上，展开第五个实验的自主设计。实验分别是菌落总数测定，霉菌和酵母的检查和计数，乳酸菌的检验，微生物药敏试验以及探讨环境因素对微生物生长的影响。

这学期的微生物实验是在上学期微生物实验的基础上的累积和扩展延伸：以培养基的制备与灭菌，玻璃器皿的洗涤、包扎和灭菌，微生物接种技术和细菌的革兰氏染色为技术基础进行的，以加强学生基础理论知识和基本技能的培养为目的。

下面我来谈谈我在实验中的心得体会。

第一个实验是菌落总数测定。让我重新认识了一下这个名词：菌落形成单位，我现在的理解就是：1ml或者1g待测样品中菌落的个数，一定要注意的是单位是CFU/ml或CFU/g。还有就是要掌握好对高压蒸汽灭菌锅的操作。实验之前要充分做好预习工作，以便实验的进行。由于是测定微生物实验，就要尤其小心其他杂菌的混入影响实验结果。因此要做好实验仪器和各种试剂的灭菌，有培养皿，试管，移液枪头（装在盒子中），按要求配置好的琼脂培养基和生理盐水，按各自要求用纱布和报纸包扎好，送入高压蒸汽灭菌锅进行灭菌。玻璃仪器在包扎前要进行清洗，并烘干，以免水分沾湿报纸。灭完菌后取出物品进入超净工作台，超近工作台的紫外灯在进入20分钟前开启，并在进入时关闭，以免影响人体。要对台面进行消毒处理，用酒精擦拭。可以在等待琼脂培养基冷却到50摄氏度左右前对待测样品进行10倍系列稀释至需要的浓度。要注意的是一定要标记好浓度或者按顺序排列在试管架上以免弄混，同一个试管里吸取样品才能用同一个枪头进行移液。再进行平板接种。待琼脂培养基冷却好后，用右手打开纱布并将锥形瓶拿住，将瓶口靠近酒精灯再进行灭菌，左手拿培养皿用大拇指和食指稍微打开培养皿盖，将琼脂培养基倒入培养皿中心内，不用倒很多，使琼脂培养基没过培养皿表面即可。培养皿一定是平拿在手上的，倒好后轻轻盖上培养皿盖，缓慢地平方在超净工作台台面边缘处，再推至中间。再用移液枪取1ml样品快速打入培养皿中央，盖上培养皿盖，然后用手轻轻摇晃，千外不要太大力。然后贴上标签记号，静置。如此依次操作下去。静置一段时间待培养基凝固后倒置放入恒温培养箱培养一段时间再取出进行观察计数。

我们组的实验结果不甚理想，培养皿中的微生物都是连成一片的，或者是培养皿壁上也都长着，主要是由于待测样品打入培养皿后，摇晃不均匀或者太大力了，以至于菌液没分散开来或是跑到培养皿壁上去了。 第一个实验的操作室下面四个实验的操作基础。基本操作步骤都是相似的，只是待测微生物不同和根据不同微生物要配置不同的琼脂培养基。

第二个实验是霉菌和酵母的检查和计数。用到的培养基是马铃薯葡萄糖琼脂培养基和孟加拉红培养基，都是用于培养霉菌和酵母的。要注意的地方与第一个实验一样是灭菌和避免引入杂菌，还有就是，混匀菌液时要慢慢地、轻轻地移动培养皿。这个实验有两个菌要观察，不过由于两个菌的菌落形态差异比较大，所以还是比较简单就能识别的：

孟加拉红培养基中，菌落的红色比培养基的红色颜色更重，菌落颜色是大红色，培养基颜色是粉红色。在孟加拉红培养基表面的酵母菌菌落是圆形，边缘整齐，表面比较光滑湿润，形态较小。位于孟加拉红培养基内的菌落则是三角形和四角形，还有多角形。边缘都是整齐的，不像霉菌菌落的边缘有菌丝。霉菌形成的菌落较稀松，多成绒毛状，絮状，形态与酵母相比较大。

第三个实验是乳酸菌的检验。用到的培养基是MRS培养基、莫匹罗星锂盐改良 MRS 培养基和MC 培养基，MRS培养基培养的是乳酸菌，莫匹罗星锂盐改良 MRS 培养基培养的是双歧杆菌，MC 培养基培养的是嗜热链球菌。乳酸菌总数结果减去双歧杆菌与嗜热链球菌计数结果之和即得乳杆菌计数。

要注意的是该实验用的是平板涂布法接种，是待培养基凝固后吸取1ml酸奶样品稀释匀液，用无菌涂布棒涂抹均匀。倒置培养一段时间，观察菌落形态及计数菌落。由于乳酸菌和双歧杆菌都是需要厌氧培养的，所以要求从样品稀释到平板涂布要求在15分钟内完成。

第四个实验是微生物药敏试验。本实验主要用了2种方法：纸片扩散法和牛津杯法。纸片扩散法是将含有定量抗菌药物的滤纸片贴在已接种了测试菌的琼脂表面上，纸片中的药物在琼脂中扩散，随着扩散距离的增加，抗菌药物的浓度呈对数减少，从而在纸片的周围形成浓度梯度。同时，纸片周围抑菌浓度范围内的菌株不能生长，而抑菌范围外的菌株则可以生长，从而在纸片的周围形成透明的抑菌圈，不同的抑菌药物的抑菌圈直径因受药物在琼脂中扩散速度的影响而可能不同，抑菌圈的大小可以反映测试菌对药物的敏感程度，并与该药物对测试菌的最小抑菌浓度（MIC）呈负相关。牛津杯法加的是试剂，卡那霉素试剂和医用酒精，查看它们对细菌的抑菌效果。

要注意2种方法都需要空白对照试验实验，前者为不加任何东西的灭菌小圆滤纸片，后者为无菌水。用的也是平板涂布法接种。1法：镊子在夹有抗菌物质的纸片和不加任何东西的灭菌小圆滤纸片时都要进行酒精灯灭菌，以免影响实验准确度。2法：在涂布好的培养基表面用镊子轻轻置灭好菌的牛津杯。注意不用按压的，不然挤压会致培养基表面破裂，会影响实验结果。待培养好后取出观察并测量抑菌圈直径，结果单位用毫米计。

第五个实验是自主设计实验环境因素对微生物生长的影响。选取3个环境因素物理、化学和生物因素均可进行设计。根据前四个实验的基础，通过小组探讨和交流设计出实验方案。并加以验证。通过自主设计实验可以结合小组的智慧，加强团队协作精神和创新思维，通过实验可以验证理论，增加感性认识，培养独立工作能力和思考能力，并使具有过硬的专业技术水平。

通过这次的实验，我明白了任何事情丢不是一蹴而就的，而是一个慢慢积累的过程。虽然实验结果不是很理想，但是我参与了过程，通过小组讨论我们也分析了失败的原因，找到了解决的方法，避免了下一次失误。并且从中理解了团队讨论和合作的重要性。以上即是我的全部感想。

推荐第4篇：微生物实验

1 微生物区系分析方法

分别在茯茶“发花”不同阶段取样，采用稀释涂布平板法，对样品中的微生物进行分离、纯化和计数。

1.1 分离培养基

细菌分离：

采用牛肉膏蛋白胨培养基：牛肉膏3g、蛋白胨10g、NaCl 5g、琼脂20g、蒸馏水lO00mL。将上述成分溶解定容，调pH7.2～7.4，分装，12l℃灭菌20min。倒平板前按50μg/ml的量加入用乙醇溶解的制霉菌素或放线菌酮（起抑制霉菌的作用）。 酵母菌分离: 采用YPD培养基：葡萄糖20g、蛋白胨10g、酵母膏10g、琼脂20g、蒸馏水1000ml、pH自然，113℃灭菌30min。。 霉菌分离：

采用PDA培养基：称取200g马铃薯，洗净去皮切碎，加水1000mL煮沸半个小时，纱布过滤，定容至1000mL，添加20g葡萄糖和17-20g琼脂并定容至1000mL，121℃灭菌20min。等降温至55℃左右时，加入氨苄青霉素（或链霉素）50μg/ml(真菌分离计数时用以抑制细菌的生长)。或者加入氯霉素或庆大霉素灭菌之前加入。 放线菌分离：

采用高氏一号培养基：可溶性淀粉20g、氯化钠0.5g、硝酸钾lg、磷酸氢二钾 0.5g、硫酸镁0.5g、硫酸亚铁0.01g、琼脂18～20g、蒸馏水1000ml、pH7.2～7.4，121℃灭菌20min。可在盛无菌水的三角瓶中加10滴100g/l的石炭酸（苯酚）溶液和50μg/ml的制霉菌素以抑制细菌和霉菌的生长。

察氏培养基(1L)：葡萄糖30g；MgSO4·7H2O 0.5g；NaNO3 3.0g；KCl 0.5g；FeSO4·7H2O 0.01g；K2HPO4 1.0g；琼脂20g(观察霉菌形态用)，如要分离用需要灭菌后加30U/mL链霉素)。

其他鉴定用培养基成分及配方参照周德庆《微生物学实验手册》 1.2 计数方法

计数方法参照GB/T4789.2-2003《食品卫生微生物学检验菌落总数测定》的测定方法 1.3 取样：每隔2天取一次样，每个样至少做1次重复，总共取7次样，为了减少误差，尽量取同一批样。尽量保证茯砖茶中微生物种类和数量不发生较大变化，样品取回后立即进行微生物分离计数。在取样时要测定发花环境（烘房）里的温度、湿度，取回样品后，要测定茶样的含水量和pH值。其余不做微生物分析的茶样应立即放在-20℃的冰箱里低温保存。

pH值的测定：准确称取2.00g茶样，加50ml蒸馏水，置于150ml三角瓶中，在振荡器上振荡浸提20分钟，过滤，滤液置于100毫升烧杯中，然后用通过标准pH溶液校正后的Backman电子酸度计，测定浸提液的pH值，每个试样重复两次。

1.4 分离、纯化茯砖茶中的微生物

菌种分离：以无菌操作分别称取试样25克，投入盛有玻璃珠及225ml灭菌生理盐水的500ml三角瓶内，振荡20min，用无菌移液管吸取1ml菌悬液，加到9ml的无菌水中，然后依次制成10-2,10-3,10-4,10-5,10-6,10-7,10-8等7个浓度梯度的菌悬液，用无菌移液管吸取1ml缓缓注入平板培养基内, 稀释涂布平板培养微生物, 密封置于28 ℃条件下培养, 4～5 d 后菌落长满整个平板。

菌种纯化：根据初分菌落的形态特征, 用接种针挑取各菌落的少量菌丝体, 接种在事先准备好的PDA 琼脂培养基上(每平板内接种3个菌落) ,进行划线平板培养，菌丝体生长1周后, 根据长出的各菌落特点进行筛选和纯化, 如此反复, 直至菌落的生长状态和形态特征均表现一致时视为单一菌种的菌落。

1.5 鉴定微生物的种类

借助菌落结构和显微镜观察初步判断微生物的种类，如要进一步鉴定，可通过微生物的生理生化反应和分子生物学深入鉴定。

2 微生物的分类检索鉴定方法

2.1 细菌鉴定

细菌鉴定参照《伯杰氏细菌鉴定手册》(第八版)、《一般细菌常用鉴定方法》、《常用细菌鉴定手册》作形态观察和相关的生理生化试验。 (1)形态观察：

个体形态观察：在显微镜下观察细胞形态、大小；

菌落形态观察：观察菌落形状、大小、边缘、表面、隆起形状、透明度及培养基的颜色等。， (2)染色：革兰氏染色法、芽孢染色法等。 (3)生理生化及生态特征鉴定；

过氧化氢酶的测定、氧化酶的测定、好氧性测定、糖或醇类发酵试验、葡萄糖酸盐的氧化试验、V.P试验(乙酰甲基甲醇试验)、淀粉水解试验、明胶水解试验、硝酸盐还原试验、产生吲哚试验、H2S产生试验、石蕊牛奶试验、酪氨酸水解试验、精氨酸利用实验、柠檬酸盐或丙酸盐的利用试验、pH生长试验、生长温度的测定以及耐盐性试验等。 2.2 酵母菌鉴定

酵母菌鉴定参照《酵母菌的特征与鉴定手册》和《微生物学实验手册》对分离得到的酵母菌进行形态观察和相关的生理生化试验。 (1) 形态观察：

个体形态观察：无丝营养细胞的显微镜观察、掷孢子的形成和形态观察、子囊孢子的显微镜观察。 菌落形态观察。

（2）染色：美兰染色法。

（3）生理生化及生态特征鉴定：碳源同化试验、氮源同化试验、糖类发酵试验、产生类淀粉化合物的测定、在60﹪(w/w)葡萄糖-酵母膏中生长测试、在37℃下做生长温度的测定、脲酶试验等。 2.3 霉菌鉴定

参照《真菌的形态与分类》和《真菌鉴定手册》等相关文献，做相关的生理生化试验和形态观察。 形态观察包括：

（1） 菌落形态观察：颜色、大小、表明特征、质地等。 （2） 个体形态观察：菌丝、子实体、孢子的形态等。 2.3 放线菌鉴定

参照《放线菌鉴定手册》等相关文献，做相关的生理生化试验和形态观察。 参考文献

[1] （美）杰伊(James M．Jay)．现代食品微生物学(第五版)[M]．北京：中国轻工业出版社，2001：178-155 [2]

贾英民主编．食品微生物学[M]．北京：中国轻工业出版社，200l：346，364 [3] 周德庆．微生物学实验手册[M]。上海：上海科学技术出版社，1986，12 [4] 中华人民共和国国家标准GB/T4789.2-2003《食品卫生微生物学检验验菌落总数测定》 [5] 布坎南等．伯杰氏细菌鉴定手册(第八版)[M]。北京：科学出版社，1984，12 [6] 中国科学院微生物研究所细菌分类组．一般细菌常用鉴定方法[M]．北京：科学出舨社，1978 [7] 东秀珠，蔡妙英。《常用细菌鉴定手册》。北京；科学出版社，2001 [8] (英)J．A．巴尼特等．酵母菌的特征与鉴定手册[M]．青岛：青岛海洋大学出版社，1992 [9] 戴芳澜．真菌的形态和分类[M]．北京：科学出版社，1987，3 [10] 魏景超．真菌鉴定手册[M]．上海：上海科学技术出版社，1979 [11] 阎逊初．放线菌的分类和鉴定[M]．北京：科学出版社，1992

推荐第5篇：《微生物生理学实验》教学改革总结

《微生物生理学实验》教学改革总结

微生物生理学是微生物学的分支学科之一,主要研究微生物的形态与发生、结构与功能、生长与繁殖、代谢与调等的作用机理节。本课程主要从微生物生理学角度阐述微生物的生命活动规律，系统地介绍了微生物学的基础理论、基本方法及进行情况，融新理论、新技术、新方法为一体，利求反映微生物学最新发展动态及趋势。学生学习该课程，不但可为后续课程的学习作好准备，也可为毕业后在农林业工作实践中不断提高业务能力提供必要的基础。

教学目的：(1)使学生对微生物生命活动基本规律有比较全面、系统的认识，牢固掌握微生物生理学的基本概念、知识和原理；(2)学会微生物生理学的基本实验方法，并在科学态度、实验技能、独立科研能力等方面获得初步的训练；(3)运用所学的基本理论、知识和技能，分析和解决农业生产实践中有关微生物生理学的一般问题。

改革实验成果：

本着注重实验与理论课的教学与实践的结合的方针，引导学生将理论知识学以致用的原则，对原有的实验内容的教学大纲重新修订。针对16学时的课时要求，选取了“CTAB NaCl法细菌基因组DNA提取”、“ 大肠杆菌蛋白质提取及蛋白质电泳”、“大肠杆菌β-半乳糖苷酶的诱导合成实验”和“酵母菌原始形态观察、细胞壁破碎及其形态观察”四个大实验作为本课程的主要内容。

(1)CTAB NaCl法细菌基因组DNA提取

通过本实验，让学生能够以提取细菌DNA为目的，从原核微生物的细胞壁破碎入手，理解原核微生物细胞壁的结构与组成，使用溶菌酶、碱性物质达到降解细菌肽聚糖等细胞壁物质的目的，进一步使用苯酚-氯仿试剂去除蛋白质，使学生理解如何分离蛋白质与DNA，最后通过借助乙醇沉淀DNA的原理最终获取纯化的DNA。通过实验，使学生不仅理解原核微生物的细胞壁、细胞质和细胞核等结构组成，通过各种试剂去除不同物质，达到让学生充分理解其有关的微生物生理学知识。

学生实验报告中的结果：

(2)大肠杆菌蛋白质提取及蛋白质电泳 通过本实验使学生从蛋白质角度，理解微生物中一种重要大分子复合物的提取及其有关的检测方法。锻炼学生基本动手能力，因为在学生进行毕业实习、科创研究中，提取蛋白质的实验是必不可少的，通过该实验的实施，可以使得学生真正熟悉有关蛋白质的初步分离纯化以及鉴定的有关实验步骤及其原理，再有可以帮助学生熟悉超声波破碎仪的使用方法、SDS-PAGE的凝胶制备与蛋白电泳等知识。

学生实验报告中的结果：

(3)大肠杆菌β-半乳糖苷酶的诱导合成

通过本实验的开设，着重让学生掌握“酶学鉴定方法”、“酶活调控”等有关微生物生理学知识以及“乳糖操纵子”和“葡萄糖效应”等经典的分子遗传学知识。了解到乳糖是如何调控β-半乳糖苷酶的合成，以及为什么葡萄糖对该酶合成抑制的知识。启发学生对微生物生理学与微生物遗传学知识的实践应用，增进学生对本课程实验及其理论课学习兴趣。

学生实验报告中的结果：

(4)酵母菌原始形态观察、细胞壁破碎及其形态观察 通过本实验的开设，使学生在了解原核微生物的细胞结构的基础上，进一步了解真核微生物的细胞结构与组成。通过蜗牛酶降解酵母菌的细胞壁，让学生体会到真核微生物细胞壁是由葡聚糖等物质组成，进一步通过显微镜的观察，理解真核微生物细胞在没有细胞壁保护的情况下变为圆形，更深入地理解细胞壁的保护细胞以及维持细胞正常生理结构的作用。

学生实验报告中的结果：

推荐第6篇：微生物实验标本复习总结

微生物实验标本复习总结（王莉莉口述+教授整理版）

分类 球菌

标本名称 葡萄球菌

属 链球菌属 肺炎 链球菌

脑膜炎 球菌

淋病 奈瑟菌 革兰染色阴性杆菌

弧菌属

弧菌属

泌尿生殖道分泌物 粪便/ 血标本/c.s.f 米泔水样粪便、呕吐

物

分枝杆菌属

抗酸 阳性菌

G G

标本来源 血标本/ 脓汁标本/c.s.f 同上 铁锈色 痰液 c.s.f

G 染色方法

G

镜下描述（参考） 革兰阳性，球形，呈葡萄串状排列 革兰阳性，球形或卵圆形，呈链状排列 革兰阳性双球菌，菌体呈矛头状，宽端相对，尖端向外 革兰阴性双球菌，肾形或豆形，排列成单个、成双或4个相联 革兰阴性双球菌，成双排列；有荚膜（致病菌株可见菌毛） 革兰阴性，菌体两端钝圆，散在排列 革兰阴性，菌体只有一个弯曲，呈逗点状，

散在排列

90%开放性肺

结核/结核性脑

膜炎

无 流行性脑脊髓膜炎（流脑）

淋病 医学意义 败血症/化脓性感染/化脓性脑

膜炎 同上 大叶性肺炎

G G

肠杆菌科

G

无/败血症 /化脓性脑膜炎

霍乱

痰标本/c.s.f 抗酸染色 杆菌，被染成红色，

细长、直或弯曲、有时着色不均，呈颗粒

状排列

窄而深伤口、坏死组

织

G

革兰阳性细长杆菌；无荚膜，芽胞圆形、比菌体粗、位于菌体顶端，使细菌呈鼓槌

G

状

革兰阳性粗大杆菌；可见明显荚膜，芽胞椭圆形、位于次极端、

不比菌体粗

食物、呕吐

物、粪便

G

革兰阳性粗大杆菌，单独或成双排列，有时可见短链；无荚膜，芽胞椭圆形、位于次极端、粗于菌体，使细菌呈汤匙状或网球

拍状

厌氧性 细菌 破伤风 梭菌

产气荚膜梭菌

坏死组织 气性坏疽

肉毒梭菌 无

分类 螺旋体

标本名称 钩端 螺旋体

标本来源 血标本/ 尿标本

染色方法 镀银

镜下描述（参考） 菌体呈棕色或黑色，菌体粗大，细密的螺旋看不清楚，菌体的一端或两端弯曲成钩状 菌体呈棕黑色，周围组织呈黄色，菌体粗大，螺旋较细密而规则

棉兰

可见体积较小，只有一个细胞，呈圆形、卵圆形、梨形或棍棒形的

G

小分生孢子

革兰阳性，菌体较大，圆形；可见芽生孢子及假菌丝，出芽细胞呈卵圆形，比葡萄球菌大2-5

倍

墨汁负染 菌体呈圆形，大小不等；

外被荚膜，透明发亮，

可见芽生孢子，

无假菌丝

教授注:

1.为便于分类，特意将标本名称前置；2.镜下描述仅供参考；

3.“/”符号前后标本来源与医学意义呈一一对应关系，注意分辨；4.G---革兰染色；c.s.f-----脑脊液；

正常菌群 或条件致病菌

廯病 医学意义 钩体病

梅毒 螺旋体

硬下疳渗出液 皮肤、指（趾）甲

镀银 梅毒

真菌 皮肤廯 真菌

白假丝 酵母菌

刮屑、试子或脓、痰标本

新生 隐球菌

c.s.f

隐球菌性 脑膜炎

祝大家考试顺利!

推荐第7篇：微生物实验心得体会

微生物实验心得

姓名：关琦琦

学号：09070401048 班级：生物科学09-2班

指导老师：吾尔恩 微生物实验心得

本学期已临近尾声，我们即将告别微生物实验这门课程，在这一学期，八个微生物实验中，我们学到了许多知识，这些知识将会陪伴我们一生，下面我们就来通过一些实验来回顾一下本学期的微生物实验。

我选取的实验是《环境因素对微生物的影响》，之所以选择这则实验是因为这则实验比较简单，而且涉及面非常多。首先我们来分析一下这则实验所涉及到的知识面。环境对微生物生长影响主要分以下几种

温度：通过影响蛋白质、核酸等生物大分子的结构与功能以及细胞结构入细胞膜的流动性及完整性来影响微生物的生长、繁殖和新陈代谢。微生物群体生长、繁殖最快的温度为其最适生长温度。

PH: H+影响菌体细胞质膜上电荷性质，微生物吸收物质变化，影响代谢，高浓度H+或引起菌体表而蛋白质和核酸水解以及影响酶和活性.渗透压：微生物在等渗溶液中可正常生长繁殖；在高渗溶液中细胞失水，生长受到抑制；在低渗溶液中，细胞吸水膨胀，因为大多数微生物具有较为坚韧的细胞壁，细胞一般不会裂解，可以正常生长，但低渗溶液中溶质含量低，在某些情况下也会影响微生物的生长。

抗生素：在自然界中普遍存在微生物间的拮抗作用，许多微生物可以产生抗生素，能选择性的抑制或杀死其他微生物。

微生物的实验其实简单来说步骤几乎相同：制作培养基、倒平板、接种微生物、培养、观察菌种生长情况从而得出结论。本次实验也是这样首先制作培养基，在进行倒平板步骤时，对平板环境进行区分，然后进行接种。

在进行倒平板的时候，要注意在无菌条件下进行倒置，同时也要保持平板的厚度均匀。

在进行菌种接种的时候，选择合适的划线方式，一般是选择Z字形划线法，注意不要把平板弄破，等到平板凝固后才可以进行接种。接种时也要注意在无菌条件下接种。经过培养后，再观察最后得出结论。

通过一学期的实验，我越发的明白实验操作对于结果的重要性。实的基础。实验操作可以说是实验成 功与否的关键部分，可是马虎不得。对于需要团队合作的实验，个人 认为要有强势的人员搭档，不说是精通实验操作规程，最少也得知道实验的基本操作，掌握要做实验的操作方法，这对于后续的实验无疑 是与决定性作用的。 对于个人的实验能力，关键还是要看平时的积累，有些实验操作繁琐复杂，需要极大的耐心，这些都应该是逐渐培养起 来的。最后，简单谈一下自己在微生物实验室做实验的心得体会。刚开始的时候，最令我头痛的就是培养基的配制、消毒灭菌，培养基的配制和消毒与灭菌两个实验可以说是微生物实验的最近本课程，内容有配制培养基、分装培养基、为下次试验准备菌种及无菌器材等，内容显得非常繁多紧凑，需要准备的器材、药品及用具较多、较杂、较细。最后只能是提前参照微生物实验教材，将实验过程中所涉及到的药品、器材及仪器等统统罗列出来，计算出实验时大小材料需用的数量，这样，一方面可以有效避免在实验准备时遗忘相关物品，另一方面也可为以后同一实验的准备工作提供依据，使实验准备工作逐步趋于程序化，从而在有效低实验准备工作量的同时，最大限度地提高准备效率。还有一点很重要，在科研型实验室里就不能不说导师和师兄师姐，其实他们才是最具价值的“活文献”，他们就是实验室里的参考文献，活参考书。生物就是一门实验的科学，其中科研经验的积累就是一个非常重要的组成部分，导师和师兄师姐的一句话往往可以事半功倍，大幅提高实验的成功率和效率。总之，为了保证实验过程高质高量完成，除了实验准备及实验过 程外，还要求实验技术人员必须具备相应的素质，实验操作人员必须 具备较扎实的专业基础、熟练的实验技能及高度的责任心，在工作中要善于总结，同时还要和理论课老师积极沟通，这样才能够真正的学好微生物实验这门课程。

推荐第8篇：微生物实验心得

微生物实验心得体会

这学期的微生物实验已经结束，这是我第一次接触到微生物的世界中，以前也只是在书本中学习，但是真正走进它们的世界中是通过这个课程开始的。在开始微生物实验之前我是以为这个实验不会很难，但是通过本学期的学习发现这个课程真的很难。你不仅需要理论知识作为铺垫，你还需要有严谨的实验精神。

第一节课老师给我们介绍了我们本学期微生物实验的几个实验和报告的要求，也让我们了解了微生物实验和以往其他实验的不同。实验步骤虽然很简单，但是往往一个微小的细节处理不当也会导致你整个实验结果的失败。这个我真的深有体会，我们小组的实验结果都很不理想。实验步骤说难也不难，其实无非是先对配置培养液，然后对清洗干净的试管、培养皿以及配置好的培养液进行灭菌，等灭菌完了就放入无菌室进行细菌的接种，最后将接种好细菌和培养液的培养皿放进恒温培养箱进行培养。看似很简单的操作过程我却状况百出。我总结了几点导致这么多次实验失败的地方。第一是操作不够规范，在培养皿中倒入培养液后没有摇匀导致培养基边缘开裂，未等琼脂培养液凝固就倒置导致培养基分布不均匀。第二是理论知识欠缺，没有等培养液冷却至40到50摄氏度就倒入培养基然后马上就接种了细菌，导致细菌已经被烫死。

好在值得欣慰的是最后一个自主实验还是比较成功的。试验以环境对微生物生长的影响为题设计实验，我们小组通过PH值，温度，紫外线照射三个方面进行研究，结果很满意，很明显。大肠杆菌在PH值为7时生长最适，在温度为37℃时生长最佳，紫外线会抑制其生长。

不得不承认，通过这次实验的学习，我们学到了很多，得到了很多，有些是书本上学不到的，只有自己参与了，操作了，才会知道。也要感谢老师对我们的照顾。

推荐第9篇：微生物实验工作总结

一、教学实验室的改建与新建工作

XX 年初我院对 qj05 楼一楼进行实验室改造，成果如下：

1.更换中央实验台 8 只

2.qj05 楼 108、112 两个实验室原为工艺实验室和书库，经改造建成微生物实验室，可兼做化学类实验。

3.改建预备室 1 个

4.改建微生物培养室 1 个

5.改建饲料工艺实验室 1 个

6.改建计算机房 1 个

此次改造后，我院教学实验室增加面积 200 多平方米，并且将本科教学实验室集中在 qj05 楼一楼，可基本满足本科实验教学的需要，也便于管理。

二、教学实验室仪器设备的购置计划

最近几年食品学院在调整教学计划，增开大型综合实验的同时，也加强了实验室条件建设，基础实验分室的仪器设备得到补充更新，大大改善了学生的实验条件，因此实践教学的质量也有所提高，生均仪器设备占有量已超过 1000 元。

XX 年食品学院新开了一个食品质量与安全专业，需要进行必要的建设，另外由于我院教学实验室基础实验分室经改造后，在原信控大楼一楼成立了本科教学实验室，有五个实验室，比原先增加了两个实验室，以前由各研究所承担的部分实验课现在也由院教学实验室承担，现在承担的实验课增加了 14 门学院基础实验分室承担的实验课程增加，需要添置仪器设备；部分仪器设备需要更新；部分 实验分室的 仪器设备需要配套；学院新办专业食品质量与安全也需要进行必要的建设，由于以上原因学院向校教务处申请实验室条件建设项目预计需要建设经费 80 万元（表 1 ），但该项目 XX 年初批准后，实验室的有关同志从寒假开始就进行了采购工作，在上半年全部完成。本项目建成后，所有实验室，包括仪器设备全部可对食品学院三个专业的学生开放，除教学实验课外，对本科生毕业论文也可提供较好的条件。每年受益的学生人数约 600 （进入实验室的学生有两届）多人，并为 XX 年《食品分析》这门食品学院公共课程的教学实验提供一定的准备，该项目完成后也为学院的研究生实验课提供了较好的条件。尤其是工艺实验分室购置了一套肉制品的小型实验室加工设备，为本科教学实验以及科研项目的进行提供了必要的条件。本期建设项目结束后，教学实验室已向教务处递交了总结报告。

表 1 XX 年完成的实验室建设项目一览表

项目名称

实验分室名称

申请经费金额（元）

执行金额（元）

食品专业综合实验条件建设

工艺实验分室

304100

353605 （还未完成）

新专业食品质量与安全条件建设与仪器购置

基础实验分室

440899

293934

焙烤实验分室条件建设

焙烤实验分室

63299

63762

工艺实验分室条件建设

工艺实验分室

18000

共计（元）

826298

三、实验室岗位聘任工作

XX 年我院实验室工作人员的聘期已经到期，学院结合实验室调整的机会，通盘考虑岗位的设置，按照学校《江南大学 XX-XX 年度岗位聘任与岗位津贴的实施办法》的有关规定学院开展了 XX-XX 年度的岗位聘任工作，在实施岗位聘任与岗位津贴的过程中，学院对教职工加强思想教育工作，组织教职工深入学习有关深化教育体制改革等方面的文件、要破除平均主义，坚持以责定岗、以岗定酬、按劳分配、优劳优酬的原则，强化聘任，严格考核，岗位聘任工作在 XX 年 2 月底之前完成。通过本轮岗位聘任工作消除了部分同志的思想顾虑，充分调动了教职工的积极性，完善了学院实验室的管理，有利于完成学院的实验教学任务和科研任务。

表 2 各实验室实验人员安排情况一览表

实验室名称

实验技术人员姓名

重点实验室

2 楼

史小华

肖刚

3 楼

朱雅东

檀亦兵

4 楼

闻芳

陆建安

5 楼

袁信华

院教学实验室

主任

王希东

基础实验分室

徐榕榕

姜瑞霞

黄文利

吕源玲

暂缺编 1 人

工艺实验分室

孙定红

王革新

薛其生

邹建新

焙烤实验分室

王领军

学院仪器设备管理员

钱玲

学院维修电工

王锡栋

食品科学研究所

朱卫红

袁博

历凡

食品营养与安全研究所

代卉

张添

粮油科学研究所

潘秋琴

杨庆萍

四、教学实验室大型仪器设备的购置、安装、调试

我院教学实验室 XX 年完成了 2 台大型仪器设备安装、调试工作。

表 3 XX 年食品学院大型仪器设备安装调试一览表

仪器设备名称

实验室名称

安装调试责任人

安装调试完成日期

双螺杆挤出机

工艺实验分室

孙定红

XX.5.13

超高温瞬时杀菌装置

工艺实验分室

王革新

XX.2.19

五、教学实验室的教学任务

XX 年年底学院对实验室进行了调整，原研究所的教学实验分室全部撤消，成立教学实验中心，下辖三个实验分室：基础实验分室、工艺实验分室、焙烤实验分室。学院教学实验室承担全部实验课程的教学任务。

表 4 XX 年食品学院本科实验教学任务完成情况一览表

学期

实验课名称

课时数

实验人数

实验人时数

实验员姓名

05-06 学年

（第 2 学期）

食品基础、专业综合实验（ 02 级）

160

244

39040

徐榕榕

1952

姜瑞霞

1952

吕源玲

1952

黄文利

1952

王革新

5205

孙定红

5205

薛其生

5205

王领军

3904

潘秋琴

3904

史小华

生物化学（包括动物生物化学）

30

355

5325

徐榕榕

5325

姜瑞霞

饲料工艺

33

561

邹建新

饲料加工综合实验

30

43

1000

邹建新

90

孙定红

饲料工艺

饲料加工综合实验

100

吕源玲

100

黄文利

仪器分析（ 04 级食质）

63

472.5

吕源玲

仪器分析（ 04 级食质）

472.5

黄文利

06-07 学年

（第 1 学期）

微生物学

30

353

5295

吕源玲

5295

黄文利

现代食品微生物学和方法

95

665

吕源玲

665

黄文利

仪器分析（食科试点班）

32

240

吕源玲

240

黄文利

食品化学

27

87

1174.5

徐榕榕

1174.5

姜瑞霞

感官评定

169

3042

袁 博

多糖与糖化合物分析

21

210

徐榕榕

210

姜瑞霞

食品质构与流变

57

256.5

徐榕榕

256.5

姜瑞霞

食品生物检测技术

44

220

徐榕榕

220

姜瑞霞

食品基础、专业综合实验（ 03 级）

120

259

1554

徐榕榕

1554

姜瑞霞

1554

吕源玲

1554

黄文利

4144

王革新

4144

孙定红

4144

薛其生

6216

王领军

3108

邹建新

3108

王希东

动物解剖与组织学

26

208

王希东

饲料化学

26

234

王希东

动物生理

26

390

王希东

动物营养综合实验

80

43

3440

代卉

袁信华

合计

107002

表 5 XX 年食品学院研究生实验教学任务完成情况一览表

学期

实验课名称

课时数

实验人数

实验人时数

实验员姓名

05-06 学年

（第 2 学期）

食品酶学

32

83

1328

吕源玲

1328

黄文利

现代食品微生物学和方法

38

380

吕源玲

380

黄文利

06-07 学年

（第 1 学期）

淀粉化学

28

182

徐榕榕

182

姜瑞霞

食品酶学

32

120

1920

吕源玲

1920

黄文利

天然产物化学

27

378

王希东

现代毒理学与方法

21

36

378

徐榕榕

378

姜瑞霞

合计

8754

表 6 XX 年食品学院短学期实验技能培训实验教学任务完成情况一览表

学期

实验课名称

课时数

实验人数

实验人时数

实验员姓名

XX 年暑假（ 03、04 级培训）

生物化学（ 03 级）

307

767.5

徐榕榕

767.5

姜瑞霞

生物化学（ 04 级）

353

882.5

徐榕榕

882.5

姜瑞霞

微生物学（ 03 级）

307

767.5

吕源玲

767.5

黄文利

饲料工艺（ 03 级）

43

172

邹建新

合计

5007

六、实验室的本科教学迎评工作

按照校评估办以及教务处的工作要求，学院首先组织实验室工作人员认真学习有关评估工作的各项文件及评估方案，正确理解评估方案的内涵。通过学习评估工作文件，理解了评估工作的目的、原则、方法和内容。大家认识到我们的工作不仅仅是为了评估，更重要的是要搞好本科教学工作，在做材料工作时候注意到首先要注意材料的真实性，提供的材料必须是真实的，数据必须是可靠的；第二个就是材料必须要有针对性，即材料必须是针对评估方案的，不要有关无关的材料都放在一起；第三就是材料要有层次性；第四是材料要有原始性，最好是把原来有的文件、制度拿出来。因此每个实验室对基本情况和数据进行了仔细认真的整理和统计。

按照学校有关部门的要求，做好教学档案的归档、教学资料的整理工作，以及评估的材料工作。教学档案和教学资料的整理归档工作应该是看实验室平时工作的基础，但我们平时没有注重这方面的工作，因此工作量是比较大的，通过这次评估工作要把教学档案的归档工作规范起来。

（一）按照规定学校的六种规章制度（《学生实验守侧》、《仪器设备管理办法》、《实验室防火安全管理制度》、《仪器设备损坏、丢失赔偿制度》、《低值耐用品管理办法》、《开放实验室管理办法》和学院的有关规章制度已经在实验分室上墙。

（二）各种帐册、记录本已经按照规定填写。

（三）各实验室应按照学校的规定收集整理各种工作资料。

七、开放性实验室的建设

XX 年我院为了加强开放性实验室的管理工作，制定了《开放实验室管理暂行办法》和《开放实验室规章制度》。

（一）本科生课余研究项目进展情况

XX-XX 学年我院有 7 个本科生课余研究项目， XX 年完成了 5 个项目。

表 7 XX-XX 年 食品学院本科生课余研究项目一览表

序号

课余研究项目名称

指导教师姓名

学生姓名

备注

猪肉中沙门氏菌、金黄色葡萄球菌的快速检测

吕文平

路静、徐文婷

抗菌肽的抑菌作用及制备

乐国伟

刘卫云、王婷婷

完成

血脂代谢与机体抗氧化状况的关系

乐国伟

孙国栋、龚如

完成

寡糖的微波固相合成及生物活性评价

施用晖

原雪琦、刘意

完成

方便面的营养评价

施用晖

周成成

完成

花式香肠的研究与开发

王海鸥

王芳

完成

黑豆制品加工工艺研究

王海鸥

张海明、胡茂浩

XX 年在大三年级（ XX 届）招聘一批本科生利用已学到的知识，在教师的指导下利用课余时间进行研究活动，这样做有利于提高学生的学习兴趣，并有更多的机会锻炼学生的动手能力，也使院实验室建成真正意义上的开放性实验室。今年的课余研究项目中有 4 个项目是由学生自己提出的，这在往年是没有的。本期项目原则上应该在 XX 年 4 月 30 日 之前结束，因此目前正在进行中，但在本科评估中得到评估专家的好评。

钟 芳

平向莉 *、徐优、陈敏敏

食品化学研究室

30

红枣软糖加工（学生立项）

王海鸥

吕建功 *、赵明思、王娜、仇美娟、庞安平、金凤

本科生课余研究实验室

31

膨化食品

钱 和

朱勇进 *、姜森、冯园、张嫔娉

食品安全与质量控制研究室

注 1 ： * 者为课题组长。

2 ：本科生课余研究实验室为开放实验室，位于 qj05 楼 102 室。

（二）焙烤实验分室开放情况

一年来，焙烤实验室承担了一次本科生的大型综合实验，两期学生焙烤俱乐部培训班，研究生实验，以及有各学科组的本科生与研究生的课题。

本科生的大型综合实验：食品科学与工程学科共八个班 240 人，进行为期 3 周四个实验的遁环。

XX 年实验室举办了两期学生焙烤俱乐部培训班，第 1 期为 60 人，第 2 期为 77 人，每期 11 周，每周一次，每次下午 1 点到 5 点进行焙烤理论与实践操作培训（先讲解后操作），培训结束后进行实践操作考核和理论考试，共有 112 名通过者获得焙烤中心发的合格证书。

推荐第10篇：微生物,真菌实验

青 岛 农 业 大 学

兽医微生物学课程论文

题 目：姓 名：学 院：专 业：班 级：学 号：指导教师：

病原真菌的分离鉴定

动物科技学院 动物医学

2014年

4 月 13 日

病原真菌的分离鉴定

动医1205

李春成20121450 摘要：制作固体培养基，将A、B、D三种真菌接种到培养基和盖玻片上进行3-5d的培养（温度为28℃，观察真菌在固体培养基上的生长表现，在显微镜下观察小培养中的真菌形态，用美蓝染色液染酵母菌，进一步观察其形态。 关键词：真菌；分离；形态；接种 引言：

真菌在自然界分布广、数量大、种类多。有些真菌可引起人和畜禽疾病，有些霉菌还产生毒素，直接或间接的危害人类和动物健康。了解真菌的培养方法，认识其形态十分重要。

真菌中的酵母菌是单细胞微生物，细胞核和细胞质有明显的分化，个体直径比真菌大10倍左右，多为圆形或卵圆形。酵母菌无性繁殖主要是出芽生殖，在特殊的情况下能形成假菌丝，有性繁殖是通过结合产生子囊孢子。用美蓝染色液制成水浸片，不仅可以观察其外形，还可以区分死活细胞。

霉菌的营养体是分支的丝状体，分为基内菌丝和气生菌丝，气生菌丝又分化出繁殖菌丝，不同霉菌的繁殖菌丝可以形成不同的孢子。

霉菌的菌丝较大，细胞易收缩变形，且孢子容易飞散，所以指标本是常用乳酸石炭酸棉蓝染色液。此染色液制成霉菌标本片的特点是：细胞不变形，具有杀菌防腐作用，且不易干燥，能保持较长的时间，溶液本身呈蓝色，有一定的染色效果。

利用培养在玻璃纸上的霉菌作为观察材料，可以得到清晰、完整、保持自然状态的霉菌形态。

制作霉菌封闭标本，一般用石炭酸棉染色液封片，其中含有甘油，不易干燥，石炭酸有防腐作用，棉蓝有一定的染色作用，便于观察。 1材料和方法 1.1材料

待鉴定的三种真菌A、B、D

1.1.1培养基 PDA培养基 1.1.2仪器

悬液、载玻片、盖玻片、无菌培养皿、湿盒，1mL无菌注射器、生理盐水、酒精灯等 1.2方法

1.2.1划线分离：将接种环经火焰灭菌冷却后，取待测的真菌，按照细菌的平板划线分离法进行平板划线，即用接种环从待测培养基上蘸取菌种在平板上划1/5-1/4，划毕灼烧灭菌接种环，待冷却后，于第二段处再做划线，且从第一段处引线，划毕，灼烧灭菌接种环。冷却后，于第三段再做划线，且从第二段处引线，划毕，灼烧灭菌接种环。冷却后，于第四段再做划线，且从第三段处引线，划毕，灼烧灭菌接种环。

1.2.2小培养：用注射器吸取液体培养基于载玻片上，将接种环在火焰下灭菌，挑取待检菌放于液体培养基上，待液体培养基将要凝固，但仍有部分呈液体状时，盖上盖玻片，标记好菌种。

1.2.3酵母菌水浸片的制备：先取干净的载玻片滴上生理盐水1-2滴，将接种环在火焰下灭菌，挑取酵母菌少许，均匀涂在液滴中，再将美蓝染色液滴于载玻片上，染色2-3min后加盖玻片。（注意切勿产生气泡）然后低倍镜和高倍镜观察其细胞形态、芽殖方式。 2.结果与分析 2.1观察三个培养基：A菌在固体培养基上菌落呈油脂状，表面光滑、湿润、粘稠，颜色呈黄色。B菌在固体培养基上菌落为毡状，颜色是绿色，具有典型的放射状皱纹。D菌在固体培养基上菌落密集，最初呈白色，孢子呈黑色。

2.2实验现象

2.2.1小培养形态鉴定现象

前三图均在40X下观察）

A菌体呈圆形、卵形或椭圆形，内有细胞核、液泡和颗粒体物质。光镜下可见细胞质所在范围及细胞壁的影子，高倍镜中可现细胞核。B菌菌丝呈无色，有分隔，其分生孢子梗经过多次分支，产生几轮对称或不对称的小梗，形如扫帚，称为扫帚体。D菌菌丝无隔，有匍匐菌丝和假根，假根着生处有直立向上孢子囊梗，其顶端彭大成孢子囊，孢子囊底部有半球形囊轴。

2.2.2美兰染色现象

显微镜下看到的是单细胞, 不形成菌落的真菌，无色细胞为活酵母菌细胞，蓝色细胞为已死的酵母菌细胞。

3.讨论

本次试验做的还可以，试验结果都能看到，现象比较明显，不过，显微镜聚焦不是很好，看的不是很清楚，现象也不太明显，在做小培养时充分发挥了团队合作精神，使得试验做的很快（因为做小培养时，液体培养基温度不那么高了，凝固时间很快），做美兰染色时，也很注意没有弄进气泡，不影响观察。 4.结果

经以上试验可得出，A为酵母菌；B为青霉菌；D为根霉菌。

4.参考文献

兽医微生物实验教程

胡贵学

2006

第11篇：微生物实验教案

《微生物学》实验教学教案[实验项目] 实验一 微生物学试验常用玻璃仪器洗涤及干热灭菌 [教学时数]

3学时 [实验目的与要求]

1．认识微生物实验所需要的各种器皿，了解常用工具和仪器的名称、用途。 2．掌握对玻璃器皿的清洗、包扎方法与干热灭菌的操作过程。 [实验原理]

微生物学实验要求较高的无菌状态，因此，实验所用的器皿，大多数要进行消毒、灭菌从而用以培养微生物，所以对其质量、规格、洗涤和包扎方法均有一定要求。

清洁的玻璃器皿是实验得到正确结果的先决条件，包扎方法要能保证防止污染杂菌。

干热灭菌的原理，空的玻璃器皿一般用干热灭菌。干热灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。细胞内的蛋白质凝固性与其本身的含水量有关，在菌体受热时，当环境和细胞内含水量越大，则蛋白质凝固就越快，反之含水量越少，凝固缓慢。与湿热灭菌相比，干热灭菌所需温度要高（160～170℃），时间要长（1～2h），但干热灭菌温度不能超过180℃，否则，包器皿的纸或棉塞就会烧焦，甚至引起燃烧。 [实验材料与设备]

1．培养皿、大试管、三角瓶6只、烧杯（500ml）2只、烧杯（1000ml）1只、小试管6只、吸管（0.2ml 2支，0.5ml 2支，1ml 2支，5ml 2支）共8支。 2．去污粉、肥皂、清洗剂、毛刷。 3．棉花、扎绳、包扎纸。 [实验步骤]

（一） 学习下列常用仪器的种类、规格和应用范围 1.培养皿

由一底一盖组成一套，常用的培养皿皿底直径90 mm，高15mm,皿底皿盖均为玻璃制成。制成平板，可用于分离、纯化、鉴定菌种、活菌计数以及测定抗生素、噬菌体的效价等。 2.试管

(1)大试管(约18mm×180mm) : 可装倒平板用的培养基，可作制备斜面用（需要大量菌体时用），装液体培养基用于微生物的振荡培养。

(2)中试管[(13～15)mm×(100～150)mm]: 装液体培养基培养细菌或做斜面用，用于细菌、霉菌、病毒等的稀释和血清学试验。

(3)小试管[(10～12)mm×100mm]:一般用于糖发酵或血清学试验，和其它需要节省材料的试验。 3.三角瓶 规格有100mL、250mL、500mL和1000 mL用来装无菌水、培养基和振荡培养微生物等。 4.烧杯

规格有50mL、100mL、250mL、500mL和1000mL 用来配制培养基与各种溶液等。 5.吸管 规格有0.1mL、1mL、2mL、5mL、10mL用来量取转移各种溶液等。 6.量筒 规格有50mL、100mL、250mL、500mL。

（二） 学习玻璃器皿的洗涤方法 1.新玻璃器皿的洗涤

在2%的盐酸溶液中浸泡数小时，用自来水冲洗干净。 2.旧玻璃器皿的洗涤

（1）试管、培养皿、三角瓶：洗衣粉和去污粉洗刷，自来水冲洗 A 装有固体培养基：刮掉，洗涤

B 带菌的器皿：2%来苏尔或0.25%新洁尔灭消毒液中浸泡24小时或煮沸0.5小时，然后洗涤 C 带病原菌培养物的器皿：先高压蒸汽灭菌，倒去培养物 （2）玻璃吸管：吸管尖端与装在水龙头上的橡皮管连接，反复冲洗

A 吸过血液、血清、糖溶液或染料溶液等的玻璃吸管：立即投入盛有自来水的容器中浸泡，实验后集中冲洗。 B 塞有棉花的吸管：用水将棉花冲出，然后冲洗

C 吸过含有微生物培养物的吸管：2%来苏尔或0.25%新洁尔灭消毒液中浸泡24小时然后洗 D 吸管内壁有油垢：洗涤液中浸泡数小时，再冲洗

(三) 学习各种器皿的包扎

1.培养皿的包扎：牛皮纸或旧报纸包紧，一般以5～8套培养皿包成1包 2.吸管的包扎：

3 在上端约0.5cm处，塞入一小段1.5 cm长的棉花（勿用脱脂棉），目的是避免将外界或嘴中杂菌吹入管内，或不慎将菌液吸出管外。用4～5 cm宽的长纸条卷起来3.试管和三角瓶等的包扎：用橡皮塞和牛皮纸。 (四) 干热灭菌 1．装入待灭菌物品

将包好的待灭菌物品（培养皿、吸管等）放入电烘箱内，关好箱门。物品不要摆太挤，以免妨碍空气流通；不要接触电烘箱内壁的铁板，以防包装纸烤焦起火。

2．升温 接通电源，拨动开关，打开电烘箱排气孔，让温度逐渐上升。当温度升至100℃时，关闭排气孔。 3．恒温 当温度升达到160～170℃时，恒温调节器会自动控制调节温度，保持此温度2h。 干热火菌过程。严防恒温调节的自动控制失灵而造成安全事故。

4．降温 切断电源、自然降温。

5．开箱取物 待电烘箱内温度降到70℃以下后，打开箱门，取出灭菌物品。 [指导与训练方案]

1.通过本次实验你认识了微生物学实验常用的哪些器皿？ 2.简述玻璃器皿洗涤的基本要求。 3.简述干热灭菌的操作步骤。 [实验项目]

实验二 培养基的制备与灭菌 [教学时数]

4学时[实验目的与要求]1．了解培养基的配制原理；掌握配制培养基的一般方法和步骤。 2．了解常见灭菌、清毒基本原理及方法；掌握干热天菌、高压蒸汽灭菌及过滤除菌的操作方法。 [实验原理]

培养基是人工按一定比例配制的供微生物生长繁殖和合成代谢产物所需要的营养物质的混合物。培养基的原材料可分为碳源、氮源、无机盐、生长因素和水。根据微生物的种类和实验目的不同，培养基也有不同的种类和配制

4 方法。

从培养基的组成成分可分为: 1.合成培养基：由各种纯化学物质按一定比例配制而成。

2.半合成培养基：一部分纯化学物质和一部分天然物质配制而成。3.天然培养基：利用天然来源的有机物配制而成。

从培养基的物理状态可分为: 1.液体培养基：不加凝固剂的液体状态培养基。 2.固体培养基：在液体培养基中加入2%左右的凝固剂的固体状

态的培养基或农副产品培养基。 3.半固体培养基：在液体培养基中加入0.2—0.5%凝固剂而成的半固体状培养基。

牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基。察氏一号培养基是一种应用最广泛和最普通的霉菌培养基。

高压蒸汽灭菌方法主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。当蒸汽压达到1.055kg/cm2时，锅内温度可达到121℃，一般维持20min,即可杀死一切微生物的营养体或芽孢，而达到灭菌目的。 [实验材料与设备]

1.器材 试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒、培养基、分装器、天平、牛角匙、高压蒸汽灭菌锅、pH度纸、棉花、牛皮纸、记号笔、麻绳、纱布、吸管、培养皿、电烘箱、注射器、微孔滤膜过滤器、镊子等。 2.试剂 牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂 [实验步骤] 1.称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 2.干热灭菌：装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物

3.高压蒸汽灭菌：加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 4.过滤除菌：组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌 关键步骤及注意事项1.要严格按配方配制。 2.调pH不要过头。

3.干热灭菌要注意物品不要堆放过紧，注意温度的时间控制，70ºC以下放物、取物。4.高压灭菌要注意物品不要过多，加热后排除冷空气，到时降压回零取物。

5.过滤除菌要注意各部件灭菌，压滤时，压力要适当，不可太猛太快，滤膜要注意清洗保存。[指导与训练方案]

1.培养基配好后，为什么必须立即灭菌?如何检查灭菌后的培养基是无菌的? 2.在配制培养基的操作过程中应注意些什么问题?为什么? 3.培养微生物的培养基应具备哪些条件?为什么? 4.培养基的配制原则是什么?

5 [实验项目]

实验三 环境和人体微生物的检测及无菌操作技术[教学时数]3学时 [实验目的与要求]

1.通过检测环境和人体中微生物的存在，体会微生物分布的广泛性。

2.学习无菌操作的技术，掌握利用稀释涂布平板法从土壤中分离微生物的方法。[实验原理] 自然环境中和人及动物的体表、体内都存在大量的微生物，它们一遇到适合的条件就会大量繁殖。当把取自不同来源的含菌样品接种于含有生长发育需要的各种营养成分的固体培养基时，就会形成肉眼可见的微生物集体群落-菌落。 每种微生物菌落都有其独有的特点，如大小、颜色、表面干燥或湿润、隆起或扁平、粗糙或光滑、边缘整齐或不整齐等。因此，可以通过平板培养来检测不同环境下微生物的数量、种类和特点。 [实验材料与设备] 1.恒温培养箱、磁力搅拌器、移液枪

2.培养基：牛肉膏蛋白胨培养基、察氏一号培养基；地面以下5-10cm的土壤； 3.酒精灯、无菌棉棒、无菌生理盐水、涂布棒、记号笔、培养皿、吸管、试管、三角瓶 [实验步骤] 1.无菌操作技术 在酒精灯火焰旁操作，将融化并冷却至不烫手的灭菌固体培养基倒入无菌的培养皿，倒量为容积的1/3~1/2或者覆盖皿底5毫米左右，然后平放到桌面待其凝固即为无菌平板。

2.土样的稀释分离

制备土样悬浊液：称取土样1g，迅速倒入盛有99ml无菌水和玻璃球的三角瓶中，置入磁力棒，搅拌10-15min，使土样充分打散，即成10-2的土壤悬浊液。

6 稀释：用无菌移液管吸10-2的土壤悬液0.5mL，放入4.5mL无菌水中即为10-3稀释液，如此重复，可依次制成10-3～10-6的稀释液。(注意：操作时每一个稀释度换用一支移液管，每次吸入土液后，要将移液管插入液面，吹吸3次，每次吸上的液面要高于前一次，以减少稀释中的误差。) 3.环境及人体各部位取菌样 4.标记、培养

标记： A-Ⅰ-1- 10-5姓名

按培养基类别：细菌培养基--A，霉菌培养基--B 按3个大组：Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、按4个中组：1-4 按样品类别：10-

5、10-

6、口腔--a、鼻腔--b、头发--c、空气--d按个人标记：姓名

培养：将接种的平板分别放入细菌和霉菌培养箱中培养。霉菌保持25-27℃，3-5天；细菌35-37℃，1-2天。

[指导与训练方案]

1、无菌倒平板时注意的事项有哪些？

2、平板接种后为什么要倒置培养？

3、通过本次试验你学到了什么？有什么体会？ [实验项目]

实验六 细菌的单染色与革兰氏染色 [教学时数] 3学时

[实验目的与要求]

1.学习对细菌的涂片、染色和无菌操作技术。

2.了解染色原理、学习并掌握单染色和革兰氏染色技术。。 [实验原理] 细菌的细胞小而透明，在普通的光学显微镜下不易识别，染色后，菌体与背景形成明显的色差，从而能更清楚地观察到其形态和结构。

微生物学中常用的是单染色法和革兰氏染色法。染色部位分芽孢、鞭毛、荚膜染色

其机理主要是由于两类细菌的细胞壁成分和结构不同。G+菌，肽聚糖多，脂质少，酒精不易进入； G-菌，肽聚糖少，脂质多，酒精易进入 [实验材料与设备] 1.菌种：E.coli （大肠杆菌）、B.subtilis（枯草芽孢杆菌）、玉米细菌等

2.试剂：石炭酸复红染色液、革兰氏染色液(草酸铵结晶紫、碘液、95%乙醇、沙黄染色液）

7 3.其他：显微镜、载玻片、生理盐水、酒精灯、接种环、吸水纸、擦镜纸等 [实验步骤]

一、单染色法： 滴无菌水→ 涂片→自然干燥→ 固定→染色→水洗→干燥→镜检（高倍镜、油镜）

二、革兰氏（Gram）染色法

1.涂片

2.初染：在做好的涂面上滴加草酸铵结晶紫染液，染1-1.5分钟，倾去染液，流水冲洗至无紫色。3.媒染：先用新配的路哥氏碘液冲去残水，而后用其覆盖涂面14.脱色：除去残水后，滴加

95%酒精进行脱色约

30

分钟，后水洗。

秒，后立即用流水冲洗。

5.复染：滴加番红染色液，染1-1.5分钟，水洗后用吸水纸吸干。6.镜检：观察染色结果并绘图。 [指导与训练方案]

1.革兰氏染色过程中大肠杆菌、枯草杆菌、玉米细菌、金黄葡萄球菌等分别被染成什么色，分别为革兰氏反应的什么菌 ？

2.涂片用的玻璃片为什么不得有油污？为什么涂片要求菌膜要均匀、薄？ 3.革兰氏染色的原理 4.染色注意事项有哪些？ [实验项目]

实验七 微生物的显微镜计数、大小测量和酵母菌的死活鉴别 [教学时数] 5学时

[实验目的与要求]

1.学习并掌握利用显微镜直接计数的基本方法。2.了解并掌握酵母菌的死活鉴别染色的原理和技术 [实验原理] 1.两种常用计数方法，即直接计数法（血球计数板计数法）和间接计数法（平板菌落计数法）。本实验是利用血球计数板进行直接计数。

2.利用血球计数板，在显微镜下进行计数，由于计数室的容积是一定的，所以可以根据在显微镜下观察到的微生物数目来换算成单位体积内的微生物总数目。由于此法计得的是活菌体和死菌体的总和，故又称为总菌计数法。 3.美兰（氧化型呈蓝色，还原型呈无色），活的酵母菌具有将氧化型美兰还原成还原型的能力，故染色后是透明的，而死的酵母菌则被染成了蓝色。

计数方法：计数时，通常数五个（或四个）中方格的总菌数，然后求得每个中方格的平均值，再乘上25或16，就得出一个大方格中的总菌数，然后再换算成lml菌液中的总菌数。

8 设被选作计数的中方格中的总菌数为A，菌液稀释倍数为B，

如果是25个中方格的计数板，则1mL菌液中的总菌数=A/5×25×104×B=50000A·B（个） 如果是16个中方格的计数板，则1mL菌液中的总菌数=A/4×16×104×B=40000A·B（个） [实验材料与设备] 酵母菌悬液（市售的干酵母粉）血球计数板、盖玻片、吸水纸显微镜、接种环、分类计数器 0.1%的美蓝染色液 [实验步骤] 1 制备菌悬液、染色 用吸管吸取菌悬液（1滴）加入试管，用生理盐水（8滴）进行稀释，滴加（1滴）美兰染色液。

2 加菌悬液样品 将清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片，再用毛细滴管将摇匀的菌悬液由盖玻片边缘滴一小滴，让菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自动进入计数室，用吸水纸吸去多余水液（注意一定不要有溢出和产生气泡）。 3 显微镜计数 加样后静止1 min，先用低倍镜然后换成高倍镜，计数时，对位于线上酵母菌，一般只数上方和左边线上的，当酵母菌芽体达到母细胞大小的二分之一时，可记作两个细胞。计数一个样品要从两个计数室中计得的值来计算样品的含菌量。

4 清洗血球计数板 计数完毕，将计数板在水龙头下冲洗干净，切勿用硬物洗刷，洗完后自行晾干或用电吹风吹干。 5.计算 ：利用相应公式进行计算（见前面公式或者课本公式），并将实验结果填入作业中的表格内。 实验注意事项

1.要正确使用显微镜，光线亮度要调的合适。

2.菌液制备要精准，稀释倍数要合适。如果浓度过大就再稀释，如果过小再重做。 3.计上不计下，计左不计右。出芽计一半

4.浓度稀释标准：以每小方格内含有5-10个酵母细胞为宜，一般稀释10倍即可。5.计数室内一定不要有溢出和产生气泡。

6.其他微生物孢子技术与酵母菌类似，基本操作一样。7.确保血球计数板清洗干净。 [指导与训练方案] 1.使用血球计数板计数时，应注意什么？ 2.将计数结果填入表格中。

3.简单说明酵母菌死活染色的原理。[实验项目]

实验八 微生物细胞大小的测定 [教学时数] 3学时

[实验目的与要求]

9

1.了解测微尺的构造和使用，学习并掌握测定微生物细胞大小的方法。[实验原理] 微生物细胞的大小的测量是在显微镜下用目镜测微尺来进行的，但由于测量的是放大后的图像，故目镜测微尺在不同放大倍率下每格实际代表的长度也随之变化，因此，需用物镜测微尺来校正在不同放大倍率下目镜测微尺每格所代表的实际长度。

物镜测微尺是中央刻有精确刻度的载玻片，一般是将1 mm等分为100格，每格长0．01mm，即10 um，它不直接用于测量细胞大小，而是用于校正目镜测微尺的每格的相对长度。

[实验材料与设备] 酵母菌悬液（市售的干酵母粉）或者制作的霉菌装片

目镜测微尺，物镜测微尺、显微镜、载玻片、盖玻片、吸水纸、0.1%的美蓝染色液 [实验步骤] （—）装目镜测微尺

（二）校正目镜测微尺

1.将物镜测微尺刻度面朝上放在显微镜载物台上

2.先用低倍镜观察，将目镜测微尺刻度与物镜测微尺的刻度平行。使两尺的第一条刻度线相重合，再寻找两尺的另 10 一条重合的刻度线，分别记录两重合线之间物镜测微尺和目镜测微尺所占的格数，由公式计算出目镜测微尺每格所代表的长度。

3.用同样的方法换成高倍镜进行校正，记录并计算在每种倍率下目镜测微尺每一格所代表的长度。

（三）酵母细胞大小的测定

1 制备菌悬液、染色： 用吸管吸取菌悬液（1滴）加入试管，用生理盐水（8滴）进行稀释，滴加（1滴）美兰染色液。

2 制片： 用吸管吸取1滴上述菌悬液滴加到干净的载玻片上，盖上盖玻片（注意一定不要有溢出和产生气泡），将多余菌液用吸水纸吸干。

3 显微镜下观察、测量：在不同倍率下测量菌体的长度和宽度，记录测定值，并计算出酵母的长、宽值。 [指导与训练方案] 1.为什么更换不同放大倍数的目镜或物镜时，必须用镜台测微尺重新对目镜测微尺进行校正? 2.如何校正目镜测微尺？ ３．如何测定细菌的大小？

[实验项目1]实验1 常用玻璃仪器包扎及干热灭菌；培养基的制备（口述）与高压蒸汽灭菌（操作-必做） 1.1 培养皿、试管、吸管的洗涤包扎及干热灭菌（操作-必做） 1.2 培养基分装到三角瓶和试管与高压蒸汽灭菌（操作） [实验项目2 实验2 无菌操作技术，倒平板和接种（操作-必做） 1.倒平板，以清水代替；试管接试管；试管接培养皿 [实验项目3] 实验3 细菌的革兰氏染色（操作-必做） 1.枯草杆菌 [实验项目4] 实验4 微生物的显微镜计数（操作-必做）

酵母菌[实验项目5]实验5 微生物细胞大小的测定（操作） 会校正和测量酵母菌或真菌菌丝

第12篇：微生物实验韩语

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第13篇：微生物实验复习

微生物实验复习

1.微生物实验室的注意事项是什么？

答：防止病原微生物的散布，防火，节约，标记，记录，安全，清洁与秩序。

2.观察常用什么显微镜？它主要有哪几部分组成？

答：观察细菌常用普通光学显微镜（油镜）。它主要有光学部分和机械部分组成，光学部分由目镜、物镜、反光镜和聚光器组成：机械部分由镜座、镜筒、镜臂、转换器，镜台、粗细调节器。

3.使用油镜时用什么作为物镜与玻片间的介质，有几种？

答：加拿大树胶、二甲苯、石蜡、松柏油、甘油、水、香油

4.观察细菌时显微镜的操作步骤是什么？注意事项是什么？

答：操作步骤：放置好显微镜；调节好光源；低倍镜观察，高倍镜观察，油镜观察；清洁显微镜；还原显微镜。

注意事项：

5.制备细菌染色标本片时应注意哪些事项？

答：1）接种环要充分灭菌，避免带入新的细菌

2）加蒸馏水时，应用接种环取少量蒸馏水于载玻片上，否则自然干燥的时间会过长

3）钓菌时，试管口要在酒精灯附近，避免新的细菌进入菌种内

4）火焰固定时，热干燥的时间不宜过长，以不烫手为度

5）水洗时，先用蒸馏水冲洗平放的玻片，再冲斜放着的玻片

6）制片完成后，要待玻片完全干燥后才能油镜进行镜检

6.图片固定的意义何在？固定时应注意什么问题？

答：意义：a。除去抹片的水分，涂抹材料能很好的贴附在玻片上，以免水洗时易被冲掉

b.使抹片易于着色或更好的着色，因为变性的蛋白质比非变性的蛋白质着色力更强

c．可杀死抹片中的微生物

固定时注意事项：1）火焰固定时只略作加热进行固定，但不能太热，以不烫手为度，同时加热时间和加热温度也应控制好，以保持细胞形态结构的完整性。2）化学固定时，若作姬姆萨染色就不用火焰固定，而用甲醇固定。

7.细菌染色的原理是什么？

答：细菌的等电点较低，约在pH2—5之间，故在中性、碱性或弱碱性溶液中，菌体蛋白质电离后带负电荷，易于带正电荷的碱性染料如龙胆紫及碱性复红等结合，使细菌被染成紫色或红色。

8.试述细菌革兰氏染色法的步骤及结果。

答：1）加草酸铵结晶紫染色液1—2min ，水洗； 2）加革兰氏稀碘液1—3min， 水洗；

3）加95%酒精脱色0.5min ，水洗； 4）10倍稀释石碳酸复红液复染10—30s，水洗

5）结果蓝紫色：革兰氏阳性菌红色：革兰氏阴性菌

9.试述培养基制备的原则和要求。

答：原则：

要求：1）培养基必须含有细菌生长所需要的营养物质；2）培养基的材料和装培养基的容器应没有抑制细菌生长的物质；3）培养基的酸碱度应符合细菌生长的要求；4）所制培养基应该透明；5）培养基必须彻底灭菌，不得含有任何活的细菌。

10.试述普通肉汤培养基的制备方法及其用途。

答：成分：牛肉膏3—5g；蛋白胨10g；氯化钠5g；水1000mL；

用途：1）用作细菌的液体培养；2）检查细菌的发育状况，以及形成的沉淀物、菌膜、菌环等；3）制作固体培养基的基础。

11.试述普通琼脂培养基的制备方法及其用途。

答：成分：普通肉汤培养基1000mL；琼脂20—30g

用途：1）细菌的分离培养、纯培养；2）观察菌落形状及保存菌种；3)制作特殊培养基的基础。

12.细菌分离培养的目的是什么？何为纯培养？

答：目的：由于细菌感染而致病的各种标本及带菌者所需检查的各种标本，往往并非单一的细菌，而且混有其它非致病菌，因此，当对此标本做出细菌鉴定时，就必须从标本中分离出致病菌。

纯培养：只在单一种类存在的状态下所进行的生物培养。纯培养技术：对已得到的可疑病菌进行细菌鉴定及菌种保存等培养成为纯培养技术。

13.培养皿培养时为什么要倒置？

答：1）便于操作；2）使接种的细菌在培养皿上生长良好；3）防止空气中的细菌进入培养皿中造成污染；

4）防止蒸发的水分形成水珠掉在培养皿上破坏菌落。

14.细菌分离培养的方法有哪些？常用什么方法？

答：细菌分离培养的方法有划线分离培养法、斜面移植法、肉汤增菌培养等。常用方法是划线分离培养法。

15.细菌菌落特征怎样描述？

答：大小、表面性状、形状、边缘、隆起度、颜色及透明度、硬度、溶血。

16.在挑取固体培养基上的细菌做平板分区划线时，为什么在每区之间都要将接种环上剩余的细菌烧掉？ 答：目的是为了达到使被检材料适当的稀释，以获得单一的菌落，防止发育成菌苔，能更好的鉴别菌落的性状。

17.革兰氏染色的关键步骤是什么？

答：酒精脱色，过度时，革兰氏阳性菌易被误认为是革兰氏阴性菌；时间过短时，革兰氏阴性菌易被误认为革兰氏阳性菌。

18.当你对未知菌进行革兰氏染色时，怎样保证操作正确，结果可靠？

答：先做一个预实验，取已知革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌进行革兰氏染色，如实际染色结果与理论结果相等，则用这个实验参数（染色、脱色、水洗、复染时间），否则应改变实验参数再试验，直到在当时的实验环境时的实验参数可以确保染色正确，然后再去染未知菌。

19.解释所做生化实验的原理？作生化实验时有哪些注意事项？

答：原理：微生物生化反应是微生物分类鉴定中的重要依据之一。细菌生化实验就是检测细菌是否利用某种物质并进行代谢及合成产物。判断和确定细菌合成和分解代谢物的特征，借此来鉴定细菌的种类。 理论依据：不同的细菌含有不同的分解代谢酶，具有不同的分解代谢途径，对同一营养物质的分解代谢及其产物有所不同。

注意事项：1）纯培养物方可进行生化实验；2）接种时避免交叉污染；3）标记必须准确；4）试剂可用标准菌株作对照。

20.在圆纸片法中判定细菌对药物敏感程度的方法是什么？

答：根据药物纸片周围有无抑菌圈及其直径大小来判断该菌对各种药物的敏感程度，分为高度敏感、中度敏感、低度敏感和不敏感。不同敏感程度在指导临床用药时可加剂量。

21.多杀性巴氏杆菌的培养特征及生化特征有哪些？

答：培养特征：在鲜血平板上生长良好，菌落呈淡灰色、圆形、湿润、呈露珠样小菌落，无溶血。在普通培养基上生长不良，在麦糠凯培养基上不生长。

生化特性：不分解乳糖、吲哚试验阳性、硫化氢阳性等。

22.结合微生物实验室诊断要求简述动物尸体剖解的注意事项

答：1)怀疑死于炭疽的动物严禁尸体剖解；2）有针对性的采集病料；3）做好个人的防护和环境消毒工作；

4）盛装病料的容器要求无菌；5）无菌操作；6）病料必须注明名称；7）必须低温保存，及早送检；8）动物尸体必须妥善处理（深埋、焚烧）

23.简述瑞氏染色和姬姆萨染色方法及结果

答;瑞氏染色法：1）组织触片或推片，自然干燥；2）在干燥的组织涂片上加瑞氏染液染1—3min，勿使染液干；3）直接滴加与瑞氏染液等量的蒸馏水到涂片上，吹气混匀，继续染3—5min，水洗，干燥，镜检。 姬姆萨染色法：1）组织涂片，自然干燥；2）置于无水甲醇中固定3—5min；3）置于新配置的姬姆萨染液中（一份染色液原液加9份中性蒸馏水）染30—60min（过夜也可）；4）水洗、干燥、镜检；5）结果：细菌呈蓝青色，组织、细胞呈其它颜色，视野呈淡红色。

24.多杀性巴氏杆菌在纯培养和病料组织中的形态特征有什么差别？检查时各用什么方法？

答：在纯培养中的形态是淡灰色，圆形，湿润，露珠样小菌落，菌落周围无溶血圈，检查时用革兰氏染色法。在病料组织中形态：呈典型的两级着色，检查时用姬姆萨染色、美蓝染色或瑞氏染色。

25.鸡胚接种时应注意哪些事项？

答：1）操作过程应在无菌条件下进行；2）照蛋时，要注意避开头部和血管划圈；3）接种时要将鸡蛋注

射部位消毒，再打孔注射；4)吸取尿囊液时，避免使血管、卵黄破坏而污染尿囊液；5）去壳时，剪刀、镊子要消毒，注射后用石蜡封闭小孔。

26.常用鸡胚接种方法有哪些？

答：绒毛尿囊腔接种法、绒毛尿囊膜接种法、人工气室法、卵黄囊内接种法、羊膜腔内接种法。

27.病毒凝集红细胞是不是一种特异的抗原体反应？为什么？

答：病毒凝集红细胞不是一种抗原体反应，目的是检测病毒的存在。原理是病毒表面血凝集与鸡红细胞表面糖蛋白受体结合，产生凝集反应。

28.HI实验是不是特异的抗原体反应？为什么？

答：HI实验是特异的抗原体反应，HI实验是特异性抗体与相应病毒结合，使病毒失去凝红细胞的能力，从而抑制血凝现象。

29.血凝试验中为什么要加补充液？

答：补充液是代替抗体，加补充液是为了使各孔的溶液量相等，这样方便和准确的进行比较。

30.为什么加病毒液和红细胞悬液时要反向加？

答：在加病毒液时，从左至右的浓度依次降低。在加红细胞悬液时，若不反向加，操作时会将高浓度的触到低浓度的孔，影响到实验结果，所以要反向加。

31.血凝试验和血凝抑制试验中空白对照的意义。

答：通过空白对照，更准确的进行实验结果比较，是结果判定的依据。

血清对照：检测血清有无影响；红细胞对照：检测红细胞有无血凝；病毒对照：检测病毒是否能引起血凝现象。

第14篇：环境微生物实验教案

实验一显微镜使用与细菌染色法

一、实验目的

1．学习掌握显微镜的结构、功能和使用方法。 2．学习掌握细菌简单染色和革兰氏染色方法。

二、显微镜的结构与功能 1．显微镜的结构

显微镜有机械装置和光学系统两大部分组成。机械装置主要作用是使光学系统， 紧固在一个光轴直线上，而且可精确地调节各光学系统部件之间的距离，使显微镜产

生清晰的物象。其组成包括：①镜座和镜臂；②镜筒；③物镜转换器；④载物台；⑤调焦装置（粗调节器和细调节器）。光学系统使显微镜最主要地部分，起分辨和放大目的物地作用。其组成包括：①目镜；②物镜；③集光器；④反光镜；⑤光源（自然光源和电光源）。

光学显微镜基本结构：

1.照明灯(Lamp)2.聚光器(Condenser)3.载物台和切片夹(Mechanical stage and specimenretainer)4.推进器(Mechanicalstage adjustment knob)5.物镜(Objectives) 6.粗细螺旋(Course andfine focus knob)7.目镜(Oculars)8.照相机等接口(Connection to camera, etc.) 2．显微镜的成像原理

标本得到足够的照明由标本反射或折射出的光线经物镜进入使光轴与水平面倾 斜45 度的棱镜，在目镜的焦平面上，即在目镜的视场光阑处，成放大的侧光实像，该实像在经目镜的接目透镜放大成虚像，所以人们看到的实虚像。 3．分辨力与数值孔径

显微镜的光学技术参数包括：数值孔径、分辨率、放大率、焦深、视场宽度、覆 盖差、工作距离等等。这些参数并不都是越高越好，它们之间是相互联系又相互制约的，在使用时，应根据镜检的目的和实际情况来协调参数间的关系，但应以保证分辨率为准。 1． 数值孔径

数值孔径（又称开口率numerical aperture 简写NA）是物镜和聚光镜的主要技术参数，是判断两者（尤其对物镜而言）性能高低的重要标志。其数值的大小，分别标刻在物镜和聚光镜的外壳上。 数值孔径是光线投射到物镜上的最大开口角度一半的正弦，乘上标本与物镜间介质的折射率的乘积。用公式表示如下：NA=nsinu/2 成正比，与焦点的距离成反比。显微镜观察时，若想增大NA 值，孔径角是无法增大的，唯一的办法是增大介质的折射率n 值。基于这一原理，就产生了水浸物镜和油浸物镜，因介质的折射率n 值大于1，NA 值就能大于1。 2． 分辨率

显微镜的分辨率是指能被显微镜清晰区分的两个物点的最小间距，。其计算公式 是σ = λ/NA 式中σ 为最小分辨距离；λ 为光线的波长；NA 为物镜的数值孔径。可见物镜的分辨率是由物镜的NA 值与照明光源的波长两个因素决定。NA 值越大，照明光线波长越短，则σ 值越小，分辨率就越高。 要提高分辨率，即减小σ 值，可采取以下措施

（1） 降低波长λ 值，使用短波长光源。（2） 增大介质n 值以提高NA 值（NA=nsinu/2）。（3） 增大孔径角u 值以提高NA 值。（4） 增加明暗反差。 3． 放大率和有效放大率

由于经过物镜和目镜的两次放大，所以显微镜总的放大率应该是物镜放大率和目 镜放大率的乘积。显然，和放大镜相比，显微镜可以具有高得多的放大率，并且通过调换不同放大率的物镜和目镜，能够方便地改变显微镜的放大率。放大率也是显微镜的重要参数，但也不能盲目相信放大率越高越好。显微镜放大倍率的极限即有效放大倍率。分辨率和放大倍率是两个不同的但又互有联系的概念。当选用的物镜数值孔径不够大，即分辨率不够高时，显微镜不能分清物体的微细结构，此时即使过度地增大放大倍率，得到的也只能是一个轮廓虽大但细节不清的图像，称为无效放大倍率。反之如果分辨率已满足要求而放大倍率不足，则显微镜虽已具备分辨的能力，但因图像太小而仍然不能被人眼清晰视见。所以为了充分发挥显微镜的分辨能力，应使数值孔径与显微镜总放大倍率合理匹配。 4．镜头的识别

低倍、高倍和油镜接物镜的识别方法，可直接读它上面刻的倍数，简便方法是低 倍镜较短，高倍镜较长，油镜更长且上面刻有黑圈。使用时一定要识别清楚，不可认错，否则在转换物镜时会碰压镜头，损坏物镜的危险。放大倍数越高的接物镜它的焦距越小，工作距离也越小，因此油镜观察时镜头和玻片极为接近，使用时应该注意。

三、实验方法

1．用枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）作简单染色： 涂片→干燥→固定→染色→镜检

（1）涂片：在玻片中央滴一滴蒸馏水，然后取菌少许，洗入蒸馏水滴中，做成薄薄一层。

（2）干燥：细菌涂片一般应让他自然风干。有时为使它干得快些，可以把涂片小心在酒精灯火焰上微微加热烘干。

（3）固定：细菌涂片常用火焰固定法。即将涂片不快不慢地在火焰上通过2-3 次，菌体受热固着于玻片上。

（4）染色：细菌简单染色常用石炭酸复红或草酸铵结晶紫为染色剂。在已固定的涂片上加一大滴石炭酸复红染色液，使盖住整个涂抹面，静置染色1 分钟。 （5）水洗：染色完毕用自来水把玻片上的染色液冲洗干净。

（6）镜检：将染色片晾干，或用吸水纸把多余的水吸去晾干，再用显微镜观察。 2．用大肠杆菌(E.coli)和金色葡萄球菌(staphylococcua aureus)作革兰氏染色: 染色方法的要点及原理：先用结晶紫染色，再加碘液固定，酒精处理后用番红复 染。革兰氏阳性菌呈紫色，革兰氏阴性菌呈红色。

染色的具体步骤：涂片→固定→初染→媒染→脱色→复染→镜检 （1）取菌按常法涂片、干燥、固定。 （2）草酸铵结晶紫染色1 分钟。 （3）充分水洗后加碘液处理1 分钟。

（4）水洗后酒精脱色15-20 秒。（用酒精连续滴洗，至不溶出颜色为止）。 （5）水洗后加番红染色1 分钟。

（6）充分水洗，吸去余水后晾干，镜检。

四、作业

1．画出你在油镜下观察到的细菌形态并注明放大倍数？ 2．在染色中，固定一步起何作用？酒精脱色一步为何是关键？ 3．用油镜观察应注意哪些问题？滴加香柏油起什么作用？ 4．油镜使用完后应如何处理？

实验二放线菌与霉菌形态观察

一、实验目的

1．学习掌握插片法和水浸片法观察放线菌和霉菌的方法。 2．学习掌握低倍镜和高倍镜观察丝状菌体的技能。

二、实验内容

1．用插片法观察绘图放线菌的形态并注意“三丝”分化。将灭菌的盖玻片斜插在涂布放线菌孢子的培养基的平板上，一半露在外面，恒温培养后在培养基表面和盖玻片上部都有放线菌生长，小心取出盖玻片，放在干净的载玻片上，在显微镜下直接观察。

2．用水浸片法观察：青霉（Penicillium.sp）、曲霉（Aspergillus.sp）的形态和分生孢子。 根霉（Rhigopus.sp）的假根和孢囊孢子。 梨头霉（Absidia.sp）的接合孢子，木霉（Trichederma.sp）的形态，注意分枝形态。

霉菌菌丝一般可从培养体上直接调取，作成水浸片。具体方法：在清洁载玻片中央，加蒸馏水一滴，用解针挑取少量菌丝放入水滴中，这时两手各持针一支，将菌丝分开，不使缠结成团。挑开菌丝后，轻轻加上盖玻片，注意不要产生气泡，先用低倍镜后用高倍镜观察。

三、作业

1．绘图、记录南昌链霉菌、青霉、木霉、曲霉和根霉的形态。 2．绘图、记录梨头霉的接合孢子形态。 3．用水浸片法观察丝状真菌应注意哪些事项？

实验三污水环境细菌运动性与原生动物、藻类的形态观察

一、实验目的

1．学习掌握用悬滴法观察细菌运动性的方法和技术。 2．学习掌握用水浸片法观察原生动物和藻类的形态。

二、实验内容

1．用悬滴法观察污水中细菌的运动性，注意运动方向。 2．用水浸片法观察原生动物的形态、运动性并注意分类。 （1） 鞭毛虫类（Flagellata）：绿眼虫、波豆虫 （2） 肉足虫类（Sarcoclina）：变形虫、太阳虫

（3） 纤毛虫（Ciliata）：草虫、肾形虫、钟虫、豆形虫、漫游虫等 3．用水浸片法观察藻类的形态、种类并注意分类。 （1） 绿藻：空球藻属（Fudoria） 珊藻属（Scendesmus） 鼓藻属（Cosmarium） 小球藻属（Chlorella） 盘星藻属（Pediastrum）

（2） 裸藻：眼虫藻属（Euglena） （3） 硅藻：舟形藻属（Navicula） 直链藻属（Melosira）平板藻属（Tabellaria）

三、作业

1．绘图记录细菌的运动方向，悬滴法观察应注意哪些事项？ 2．绘图记录原生动物、藻类的形态、种类和名称。

实验四 微生物的大小测定与数量的测定

一、实验目的

1．学习了解测微尺的结构，掌握测定微生物大小的方法。 2．观察酵母菌的形态，掌握鉴别死活酵母菌的方法。

3．学习了解血球计数板的结构，掌握微生物数量测定的方法。

二、实验内容

1．在低倍镜和高倍镜下求出目镜测微尺的校正值。 （1） 目镜测微尺和镜台测微尺

目镜测微尺是一块圆形玻片，在玻片的中央刻有一小尺，它是在5 毫米内作50 等分刻制的，每一等份为0.1 毫米。另一规格是5 毫米作100 等分，每等分为0.05 毫米。镜台测微尺是刻在载玻片中央的小尺，它是在1 毫米内作100 等分刻成的，每等分10 微米。

（2） 目镜测微尺校正的方法

将镜台测微尺上面的透镜片取下，把目镜测微尺放在光阑上，刻度朝下。把镜台 测微尺置于载物台上，用低倍物镜检视，使测微尺位于视野中央。注意区分视野内两把尺哪个是目镜测微尺，哪个是镜台测微尺。利用推进器或转动目镜使两尺的第一条线（0 线）互相重合，然后找出另一条重合线。如重合线较多选取距0 线最远的重合线。记下两条重合线之间两尺的刻度，依公式算出目镜测微尺的校正值。目镜测微尺校正值（每刻度微米数）= 两重叠刻度间镜台测微尺格数×10 两重叠刻度间目镜测微尺格数

2．用美兰水浸片法观察酿酒酵母（saccharomyces cerevisiac）的形态，注意出芽繁殖

和死活酵母菌的染色形态，并测量大小。 3．用血球板计算黑曲霉孢子的数量。 （1） 血球计数板

利用血球计数板在显微镜下直接计数是一种常见的微生物计总数的方法。因为计 数板载片和盖片间的容积一定，所以可以根据显微镜下观察到的微生物数目来计算单位体积内微生物总数。血球计数板是一只特制载玻片。载片上有两个方格网，每一方 格网共分九个大方格，其中间的一个大方格用来做微生物计数，所以又称为计数室。计数室的刻度一般有两种，一种是每个大方格分成16 个中方格，每中方格又分成25个小方格。另一种是一个大方格分25 个中方格，每个中方格又分成16 个小方格，不论哪一种，一个大方格，都等分成（25×16 或16×25）400 个小方格。因为每个大方格边长为1 毫米，载片与盖片间距离为0.1 毫米，所以每个计数室（1 个大方格）体积为0.1 立方毫米。测出每个中方格菌数，就可以算出一个大方格的菌数，由此推算出1 毫升菌液内所含的菌数。一个大方格是16 个中方格时，应当数4 角4 个中方格（即100 个小方格）的菌数，一个大方格是25 个中方格时，除取4 角4 个中方格外，还要数中央一个中方格（即为80 个小方格）的菌数。计算公式如下： 16×25 计数板：

总菌数/ml= ×400×10000×稀释倍数=每个小方格内菌数×4×106×稀释倍数 25×16 计数板：

总菌数/ml= ×400×10000×稀释倍数=每小方格内菌数×4×106×稀释倍数 （2）血球计数板计数方法

①视待测菌悬液浓度，加无菌水适当稀释，以每小格的菌数可数为度。 ②取洁净的血球计数板一块，在计数区上盖上一块盖玻片。

③将黑曲霉孢子悬液摇匀，用滴管吸取少许，从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘摘入一小滴（不宜过多），让菌悬液利用液体的表面张力充满计数区，勿使气泡产生，并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌悬液。也可以将菌悬液直接滴加在计数区上，不要使计数区两边平台沾上菌悬液，以免加盖盖玻片后，造成计数区深度的升高。然后加盖盖玻片（勿使产生气泡）。

④静置片刻，将血球计数板置载物台上夹稳，先在低倍镜下找到计数区后，再转换高倍镜观察并计数。由于生活细胞的折光率和水的折光率相近，观察时应减弱光照的强度。

⑤计数时若计数区是由16 个大方格组成，按对角线方位，数左上、左下、右上、右下的4 个大方格（即100 小格）的菌数。如果是25 个大方格组成的计数区，除数上述四个大方格外，还需数中央l 个大方格的菌数（即80 个小格）。如菌体位于大方格的双线上，计数时则数上线不数下线，数左线不数右线，以减少误差。

⑥测数完毕，取下盖玻片，用水将血球计数板冲洗干净，切勿用硬物洗刷或抹擦，以免损坏网格刻度。洗净后自行晾干或用吹风机吹干，放入盒内保存。

三、作业

1．测量酵母菌的大小（高倍镜）： 菌名 宽（目镜格数） 长（目镜格数）平均

2．在不改变目镜和目尺，而改变物镜来测定同一酵母菌时，其结果是否相同，为什么？

3．根据你的操作，用血球计数板计数的误差主要来自哪些方面？应如何尽量减少误差，力求准确？

实验五 培养基的制备与灭菌

一、实验目的

1．学习掌握培养基的制备原理与方法。 2．学习掌握玻璃器皿的包扎与灭菌方法。

3．学习掌握高压蒸汽灭菌，干热灭菌的原理与方法。

二、实验内容 1．玻璃器皿的包扎

（1） 每4-5 人为一组包扎：直径9 厘米培养皿3 包，每包6 皿，1ml 吸管2 支，5ml吸管2 支，玻璃刮铲3 支。

（2） 每一小组制备18×180mm 试管无菌水5 支，每支4.5ml 自来水，250ml 三角瓶带玻璃珠无菌水1 瓶，装自来水45ml，以上塞好棉塞包扎后待灭菌。 2．培养基制备

（1）培养基是人工按一定比例配制的供微生物生长繁殖和合成代谢产物所需要的营养物质的混合物。培养基的原材料可分为碳源、氮源、无机盐、生长因素和水。根据微生物的种类和实验目的不同，培养基也有不同的种类和配制方法。 （2）制备流程：称量→溶解→蒸煮→调pH→分装→包扎→灭菌 （3）高氏一号培养基配方

可溶性淀粉 20g K2HPO4 0.5g KNO3 1g MgSO4.7H2O 0.5g NaCl 0.5g FeSO4 10mg 琼脂 20g 蒸馏水 1000ml PH 值 7.2—7.4 （4）每小组制备高氏培养基250ml，分装15*150mm 试管8-10 支，余液分装250ml 三角瓶2 瓶，塞棉塞包扎待灭菌。 （5）关键步骤及注意事项 ①要严格按配方配制。 ②调pH 不要过头。

③干热灭菌要注意物品不要堆放过紧，注意温度的时间控制，70ºC 以下放物、取物。

④高压灭菌要注意物品不要过多，加热后排除冷空气，到时降压回零取物。 3．消毒（disinfection）与灭菌（sterilization） 消毒：用化学或物理的方法杀死微生物的营养体。 灭菌：用物理或化学的方法杀灭物体上一切微生物。

（1）干热灭菌法：把待灭菌的物品均匀地放入烘箱中，升温至160ºC，恒温1 小时即可。此法适用于玻璃皿、金属用具等的灭菌。

（2）高压蒸汽灭菌法（一般121ºC，30min，适用培养基）：把待灭菌的物品放在一个可密闭的加压蒸汽灭菌锅中进行的，以大量蒸汽使其中压力升高。由于蒸汽压的上升，水的沸点也随之提高。在蒸汽压达到1.055 公斤/厘米2 时，加压蒸汽灭菌锅内的温度可达到121ºC。在这种情况下，微生物（包括芽孢）在15-20 分钟便会被杀死，而达到灭菌目的。如灭菌的对象是砂土、石蜡油等面积大、含菌多、传热差的物品，则应适当延长灭菌时间。

（3）间歇灭菌法：待灭菌的物品放在灭菌器或蒸笼里，每天蒸煮1 次，每次煮沸1h，连续3d 重复进行。在每两次蒸煮之间，将物品（指培养基）放在37ºC 恒温条件下培养过夜，这样可以使每次蒸煮后未杀死残留的芽孢萌发成营养体，以便下次蒸煮时杀灭。

（4）巴氏灭菌法：有些食物会因高温破坏营养成分或影响质量，如牛奶、酱油、啤酒等，所以只能用较低的温度来杀死其中的病原微生物，这样既保持食物的营养和风味，又进行了消毒，保证了食品卫生。该法一般在62ºC，30 分钟既可达到消毒目的。此法为法国微生物学家巴斯德首创，故名为巴氏消毒法。 4．棉塞的制作

三、作业

1．高氏一号培养基属于何种性质培养基？有沉淀吗？为什么？

2．高压蒸汽灭菌的过程中，应注意哪些事项，最关键的因素是什么？为什么？

实验六 环境微生物的分离与生理鉴定实验

一、实验目的

1．学习掌握平板稀释法分离环境微生物的技术。 2．学习掌握微生物生理生化鉴别的基本方法。 3．学习掌握无菌操作技术。

二、实验内容 1．土壤微生物的分离

分离微生物是，一般是根据该微生物对营养、pH、氧气等要求的不同，供给 它们适宜的生活条件，或加入某种抑制剂造成只利于该菌种生长，不利于其他菌 种生长的环境，从而淘汰不需要的菌种。分离方法用稀释平板分离法，其最终目 的是要在培养基上出现欲分离微生物的单个菌落，同时还可以测定分离的微生物 的数量。

（1）方法：将土样随机称取10g，加入至装有90 ml 无菌水带玻璃珠的三角 瓶中，旋转震荡30min，作逐级分离，逐级稀释见下图，用无菌吸管吸取不同稀 释度菌悬液0.1ml 涂布平板。 （2）稀释度选择：

①牛肉膏培养基：10 皿(稀释度10﹣4,10﹣5,10﹣6,三个重复,一个备用)； ②高氏一号培养基：10 皿(稀释度10﹣3,10﹣4,10﹣5,三个重复，一个备用)； ③真菌培养基：10 皿(稀释度10﹣3,10﹣4,10﹣5,三个重复,一个备用)；

2．用大肠杆菌和枯草芽孢杆菌分别接种糖发酵培养基、石蕊牛乳培养基、蛋白 胨培养基和淀粉培养基作生理鉴别实验。 （1）糖发酵试验

各种细菌由于具有不同的酶系统，致使它们能利用不同的底物，或虽然可 以利用相同的底物，却产生不同的代谢产物，因此可以利用各种生理生化反应 来鉴别细菌。糖发酵是最常用的生化反应，存在于大多数细菌中。不同的细菌 在糖的分解能力上存在很大的差异。有些细菌能分解某种糖并产生酸性物质(如 乳酸、丙酸、醋酸等)和气体(如二氧化碳、氢、甲烷等)，而有些细菌只产生酸 不产生气体。例如大肠杆菌分解乳糖和葡萄糖产酸并产气，普通变形杆菌分解 葡萄糖产酸产气，但不能分解乳糖。酸的产生可利用指示剂来判断。在培养基 中加入溴甲酚紫(pH5．2 为黄色，pH6．8 为紫色)，当发酵产酸时，使培养基由 紫色变为黄色。气体的产生可由发酵试管中倒置的德汉氏小管中有无气泡的出 现来验证。 （2）石蕊牛乳试验

牛乳中通常含有蔗糖、乳糖、蛋白质、酪素等成分。微生物对牛乳的利用主 要是指乳糖及酪蛋白的分解利用。牛乳中常加入石蕊作酸碱指示剂和氧化还原指 示剂。微生物对牛乳的利用可分三种情况：①酸凝固作用：微生物发酵乳糖后产 生许多酸，使石蕊变红，同时酸度很高时，可使牛乳凝固。②凝乳酶凝固作用： 某些微生物能分泌凝乳酶，使牛乳中的酪蛋白凝固，这种凝固作用在中性环境中 发生，通常这类微生物还具有水解蛋白质的能力，从而会产生一些碱性物质，是 石蕊变蓝。③胨化作用：酪蛋白被水解变得清亮而透明，胨化作用可以在酸性或 碱性条件下进行，并且一般石蕊色素还原脱色。 （3）产氨和产硫化氢试验

某些微生物具有脱氨酶，能使氨基酸在各种作用下脱去氨基而生成氨，氨的 产生可用红色石蕊试纸夹悬于培养试管的棉塞下检验，培养后试纸变蓝，即判为 产氨。

某些微生物能分解培养基中的含硫氨基酸生成硫化氢。可用醋酸铅试纸，接

20 种试验菌于培养液中，立即将试纸悬夹于棉塞下，纸条下端与液面接近，但不可 接触。如试纸变黑为正反应即产硫化氢。 （4）淀粉水解试验

某些微生物具有淀粉酶，可以使淀粉水解为麦芽糖或葡萄糖，而另一些微生 物则没有这种特性。将试验菌在淀粉水解培养基的平板上划“+”接种。培养后打开皿盖，滴加碘液于培养基，轻轻旋转培养皿，使碘液铺满整个平板。因培养基内含淀粉，遇碘立即变兰，但如果供试菌能分解淀粉，则菌落周围淀粉已被水解，此时遇碘不变色，因而菌落外围出现无色透明圈。

三、培养基的配制 1．牛肉膏蛋白胨培养基 牛肉膏 3g 蛋白胨 5g NaCl 0.5g 琼脂 20g 蒸馏水 1000ml PH 值 7.2—7.4 2．高氏一号培养基 可溶性淀粉 20g K2HPO4 0.5g KNO3 1g MgSO4.7H2O 0.5g NaCl 0.5g FeSO4 10mg 琼脂 20g 蒸馏水 1000ml PH 值 7.2—7.4 使用时加1%重铬酸钾溶液0.5ml/250ml 培养基。 3．马丁培养基 葡萄糖 10g 蛋白胨 5g KH2PO4 1g 琼脂 20g MgSO4.7H2O 0.5g 自然PH 值

蒸馏水 1000ml 煮溶后加1%孟加拉红3.3ml,搅匀。（8 磅即112℃灭 菌30min） 4．糖发酵培养基 牛肉膏 3g 蛋白胨 5g 葡萄糖 5 g 水 1000 ml PH 值 7.2-7.4 加溴甲酚紫1.6%的酒精溶液1ml（8 磅即112℃灭菌30min）

溴甲酚紫1.6%酒精溶液的配制：称溴甲酚紫1.6g 溶于50ml 酒精（95%），再加 入蒸馏水50ml，用滤纸过滤后用三角瓶装，放冰箱备用。 5．石蕊牛乳培养基

牛奶（1000g）→煮沸→离心（4500 转/分钟，5 分钟）→去脂→调PH 值 7.2→加入石蕊液使牛奶成兰色→分装15×150ml 试管→8 磅灭菌20 分钟。 石蕊液配制：称2.5g 石蕊，加50ml 蒸馏水研磨，研磨石蕊时，先加少许蒸馏水 研磨，研磨过程中慢慢滴加蒸馏水，研磨到无颗粒为止，再进行抽滤。 6.淀粉水解培养基 蛋白胨 10g NaCl 5g 牛肉膏 5 g 可溶性淀粉 5g 琼脂 20g 蒸馏水 1000 ml PH 值 7.2 7．产硫化氢培养基 蛋白胨 20g NaCl 5g 牛肉膏 2.5 g 柠檬酸铁铵 0.5g 硫代硫酸钠 0.5g 蒸馏水 1000 ml

三、作业

1．平板稀释分离环境微生物应注意哪些事项？ 2．生理鉴别试验的原理与反应有哪些？

22

实验七 环境微生物分离与生理鉴定结果检查

一、实验目的

1．学习掌握四大类微生物菌落形态的识别。

2．学习掌握环境微生物生理鉴定结果分析的原理与方法。 3．学习掌握微生物纯化培养接种的无菌操作技术。

二、实验内容

1．四大类微生物菌落形态识别

（1） 细菌：菌落表面光滑或粗糙，边缘整齐或不规则，奶油状。

（2） 放线菌：菌落表面呈绒状，粉状或绒毛状，有些产色素，有同心环，不易 调起。

（3） 酵母菌：菌落大而厚，湿润粘稠，易调起，多数呈乳白色，少数红色。 （4） 霉菌：菌落大而疏松，呈绒毛状、絮状或蜘网状，有色素，比细菌大数倍 到几十倍。

2．土壤中细菌、放线菌、霉菌分离的结果统计 3．生理生化鉴定结果检查 项目 E.coli B.subtilis CK 备注 糖发酵 产酸 产气 产酸 产气 石蕊牛乳 凝固 液化 凝固 液化 蛋白胨 产NH3 产H2S 产NH3 产H2S 产淀粉酶

4．菌落纯培养斜面接种

将分离到的放线菌单菌落，通过无菌操作技术移接到斜面培养基，30℃培养5-7 天。

实验八 水中总大肠菌群的测定－多管发酵法

一、实验目的

结合水净化工程中的细菌检验，掌握水环境监测中和给水水质检验中大肠杆菌群 数的测定方法，同时通过大肠杆菌群的测定，了解大肠杆菌群的生化特性。

二、原理

总大肠菌群可用多管发酵法或滤膜法检验。多管发酵法的原理是根据大肠菌群细 菌能发酵乳糖、产酸产气以及具备革兰氏染色阴性，无芽孢，呈杆状等有关特性，通过初发酵试验、平板分离和复发酵试验等三个步骤进行实验求得水样中的总大肠菌群数。试验结果以最可能数（most probable number），简称MPN 表示。

三、仪器

高压蒸气灭菌器；恒温培养箱；冰箱；生物显微镜；载玻片；酒精灯；镍铬丝接 种棒；培养皿（直径100mm）；试管（18×180mm）；吸管（

1、

5、10mL）；烧杯；锥形瓶；采样瓶等等。

四、培养基的制备：

1.乳糖蛋白胨培养液：将10g 蛋白胨、3g 牛肉膏、5g 乳糖和5g 氯化钠加热溶解于1000mL 蒸馏水中，调节溶液pH 为7.2—7.4，再加入1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1mL，充分混匀，分装于试管中，于115℃高压灭菌器中灭菌20min，贮存于冷暗处备用。

2.三倍浓缩乳糖蛋白陈培养液：按上述乳糖蛋白胨培养液的制备方法配制。除蒸 馏水外，各组分用量增加至三倍。 3.品红亚硫酸钠培养基

（1）贮备培养基的制备：于2000mL 烧杯中，先将20—30g 琼脂加到900mL 蒸 馏水中，加热溶解，然后加入3.5g 磷酸氢二钾及10g 蛋白胨，混匀，使其溶解，再用蒸馏水补充到1000mL，调节溶液pH 至7.2—7.4。趁热用脱脂棉或绒布过滤，再加10g 乳糖，混匀，定量分装于250 或500mL 锥形瓶内，置于高压灭菌器中，在115℃灭菌20min，贮存于冷暗处备用。

（2）平皿培养基的制备：将上法制备的贮备培养基加热融化。根据锥形瓶内培 养基的容量，用灭菌吸管按比例吸取一定量的5%碱性品红乙醇溶液（1000mL 培养基约加20mL5%碱性品红乙醇溶液），置于灭菌试管中；再按比例称取无水亚硫酸钠（1000mL 培养基约加5g 无水亚硫酸钠），置于另一灭菌空试管内，加灭菌水少许使其溶解，再置于沸水浴中煮沸10min（灭菌）。用灭菌吸管吸取已灭菌的亚硫酸钠溶液，滴加于碱性品红乙醇溶液内至深红色再退至淡红色为止（不宜加多）。将此混合液全部加入已融化的贮备培养基内，并充分混匀（防止产生气泡）。立即将此培养基适量（约15mL）倾入已灭菌的平皿内，待冷却凝固后，置于冰箱内备用，但保存时间不宜超过两周。如培养基已由淡红色变成深红色，则不能再用。

五、测定水源水总大肠菌群实验步骤

1、初发酵试验

于各装有5mL 三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液的5 个试管中（内有倒管），分别加入 10mL 水样；于各装有10mL 乳糖蛋白胨培养液的5 个试管中（内有倒管），分别加入1mL 水样；再于各装有10mL 乳糖蛋白胨培养液的5 个试管中（内有倒管），分别加入1mL1： 10 稀释的水样。共计15 管，三个稀释度。将各管充分混匀，置于37℃恒温箱内培养24h。（2）平板分离：上述各发酵管经培养24h 后，将产酸、产气及只产酸的发酵管分别接种于品红亚硫酸钠培养基上，置于37℃恒温箱内培养24h，挑选符合下列特征的菌落。

2、平板分离

品红亚硫酸钠培养基上：紫红色，具有金属光泽的菌落；深红色，不带或略带金 属光泽的菌落；淡红色，中心色较深的菌落。取有上述特征的群落进行革兰氏染色：

①用已培养18—24h 的培养物涂片，涂层要薄。 ②将涂片在火焰上加温固定，待冷却后滴加结晶紫溶液，1min 后用水洗去。 ③滴加助染剂，1min 后用水洗去。 ④滴加脱色剂，摇动玻片，直至无紫色脱落为止（约20—30s），用水洗去。 ⑤滴加复染剂，1min 后用水洗去，晾干、镜检，呈紫色者为革兰氏阳性菌，呈红色者为阴性菌。

3、复发酵试验

上述涂片镜检的菌落如为革兰氏阴性无芽孢的杆菌，则挑选该菌落的另一部分接 种于装有普通浓度乳糖蛋白胨培养液的试管中（内有倒管），每管可接种分离自同一初发酵管（瓶）的最典型菌落1—3 个，然后置于37℃恒温箱中培养24h，有产酸、产气者（不论倒管内气体多少皆作为产气论），即证实有大肠菌群存在。根据证实总大肠菌群存在的阳性管数，查后附表1“最可能数（MPN）表”，即求得每100mL 水样中存在的总大肠菌群数。我国目前系以1L 为报告单位，故MPN 值再乘以10，即为1L 水样中的总大肠菌群数。

例如，某水样接种10mL 的5 管均为阳性；接种1mL 的5 管中有2 管为阳性； 接种1：10 的水样1mL 的5 管均为阴性。从最可能数（MPN）表中查检验结果5-2-0， 得知100mL 水样中的总大肠菌群数为49 个，故1L 水样中的总大肠菌群数为 49×10=490 个。 对污染严重的地表水和废水，初发酵试验的接种水样应作1：

10、1：100、1：1000 或更高倍数的稀释，检验步骤同“水源水”检验方法。 如果接种的水样量不是10mL、1mL 和0.1mL，而是较低或较高的三个浓度的水 样量，也可查表求得MPN 指数，再经下面公式换算成每100mL 的MPN 值。

六、思考题

1、你认为要得到正确的革兰氏染色结果必须注意哪些操作?关键在哪一步?为什么?

2、大肠菌群测定利用了它的哪些生化特性？

表1 最可能数(MPN)表

（接种5 份10mL 水样、5 份1mL 水样、5 份0.1mL 水样时，不同阳性及阴 性情况下100mL 水样中细菌数的最可能数和95%可信限值）

实验九

空气微生物检测（平皿落菌法）

实验目的和原理：用营养琼脂培养基培养细菌；用查氏琼脂培养基培养霉菌；用高氏淀粉琼脂培养基培养放线菌。通过实验了解空气中微生物的分布，学习习近平皿落菌法检测空气微生物。

实验器材：高压蒸汽消毒锅，恒温培养箱，超净工作台，玻璃皿，营养琼脂培养基，查氏琼脂培养基，高氏淀粉琼脂培养基。 方法与步骤： 一．培养基制备

1．营养琼脂培养基：牛肉膏1.5g，蛋白胨5g，NaCl 2.5g，琼脂10g，加水至500ml，加热、搅拌至琼脂溶解，调pH7.2~7.4，121℃蒸汽灭菌20分钟。

2．查氏琼脂培养基：NaNO3 1g，KCl 0.25g，K2HPO4 0.5g，MgSO4 0.25g，FeSO4 0.005g，琼脂10g，蔗糖15g，加水500ml，加热、搅拌至琼脂溶解，115℃蒸汽灭菌20分钟。

3.高氏淀粉琼脂培养基：可溶性淀粉10g先用少量冷水调成糊状，在火上加热，然后加水及KNO30.5g，K2HPO4 0.25g NaCl 0.25g，MgSO4 0.25g，FeSO4 0.25g，琼脂10g，加热溶化，调pH7.0~ 7.2，补足水至500ml，121℃灭菌20分钟。 二.每组15个平皿灭菌将营养琼脂培养基、查氏琼脂培养基、高氏淀粉琼脂培养基，三种培养基各倒5个平板，冷凝。

2.在一定面积房间或室外，按4角和中央5点，每种培养基每点放一个平板，打开盖，室内放置10分钟，室外放置3分钟后盖盖，营养琼脂培养基在37℃培养24h，查氏和高氏培养基在28℃培养48h。

3.培养结束，观察各种微生物的菌落形态，将微生物种类、菌落数和计算结果记录于下表：

三．计算：空气微生物数(个/m3)=5个皿平均菌落数×50000÷平皿底面积（cm2）÷暴露时间（min）

四．卫生标准：我国还无统一的空气卫生标准，室内一般以500～1000/m3作为参考指标。

地点

采样时间

细菌菌落

霉菌菌落

放线菌菌落

计算结果（个/m3）

细菌数量

霉菌数量

放线菌数量

实验九 菌种保藏

一、实验目的

1.学习并掌握菌种保藏的基本原理。2.掌握常用的几种不同的菌种保藏方法。

二、实验原理

微生物个体微小、代谢旺盛、生长繁殖快，如果保存不妥容易发生变异和杂菌污染，甚至导致细胞死亡等现象。因此，保存好菌种是非常必要和重要的。常用的菌种保藏方法包括传代培养法、载体法、悬液法、冷冻法和真空干燥法

三、试剂与器材

1.材料大肠杆菌、青霉菌、放线菌

2.试剂液体石蜡、甘油、五氧化二磷、95％乙醇、10％盐酸、无水氯化钙、食盐、干冰

3.器材无菌吸管、无菌滴管、无菌培养皿；安额管、冻干管、40目与100目筛子、油纸、滤纸条(0.5X1.2cm)、干燥器、真泵器、真空泵、真空压力表、喷灯、L形五通管、冰箱、低温冰箱(—30℃)、超低温冰箱和液氮罐等。

四、实验内容

1.斜面保藏法 2.液体石蜡法 3.穿刺保藏法 4.砂土管保藏法

5.冷冻真空干燥保存法

五、关键步骤及注意事项

1.清楚各种保藏方法的优缺点，针对不同要求选择适宜的保藏方法。2.熔封安瓶时防止封闭不严。 3.液氮冻存操作应防止冻伤。

六、思考题

根据你自己的实验。谈谈1--2种菌种保藏方法的利弊?

第15篇：毒理学及微生物实验

实验

一、毒理学实验方法

[实验目的]通过实验，掌握实验动物的一般操作技术。

[实验材料]

实验动物：昆明种小鼠

实验器材：灌胃器、手术剪等。

[操作方法]

1.实验动物物种的选择

选择的基本原则是：选择对受试物在代谢、生物化学等与人最接近；自然寿命不太长；易于饲养和操作；经济易获得。

2.实验动物的被毛去除方法

(1)拔毛法将动物固定后，将所需部位的被毛拔去即可。

(2)剪毛法将动物固定后，用手术剪紧贴动物皮肤将所需部位的被毛剪去。

3.实验动物的处死方法

颈椎脱臼法：一只手用力住下按住鼠头，另一只手抓住鼠尾，用颈稍向后上方一拉，使之颈椎脱曰动物立即死亡。

空气拴塞法；急性大失血法和吸入法致死。

实验二 动物染毒方法

[实验目的]通过实验，掌握实验动物的一般染毒方法。

[实验材料]

实验动物：昆明种小鼠

实验器材：灌胃器、注射器、手术剪等。

三、实验方法

1 灌胃：将受试物配制成溶液或混悬液，以注射器经导管注入胃内。经口多次染毒，一般不禁食，但应每日定时染毒。

2 口服法染毒：将受试物掺入动物饲料或饮水中供实验动物自行摄入。实验动物以食物消耗量计算其实际染毒剂量。

3 经呼吸道染毒

I 静式吸入染毒：将一定数量的啮齿类动物放在密闭的染毒柜中，加入易挥发的液态受试物或气态受试物使成一定浓度。受试物浓度，以mg/m3表示。

II 动式吸入染毒：由染毒柜、机械通风系统和配气系统三部分构成

动式吸入染毒柜中受试物的浓度应实际监测。

4 经皮肤染毒经皮肤染毒的目的有两种。一种是经皮染毒毒性试验，如经皮LD50测定常用大鼠。另一种是皮肤刺激和致敏试验。

试验前用机械法或化学法脱毛。于脱毛后24小时涂抹一定量受试物，盖上一层塑料薄膜，接触规定的时间。

4.注射染毒

注射用药品，应以注射途径染毒，对大小鼠可用静脉注射，对非啮齿类可模拟临床用药途径，如狗可用后肢隐静脉注射，而啮齿类的尾静脉和肌肉注射难以多次染毒，必要时可改为皮下注射。

注射染毒，应调整受试物的pH及渗透压，pH应5～8，最好是等渗溶液，动物对高渗的耐受力比低渗强。静脉注射应控制速度，大鼠尾静脉注射最好控制在10秒以上。腹腔注射在遗传毒理学实验中有时也用，但在致畸试验、肝UDS研究不应该用腹腔注射，以避免可能的损伤和局部高浓度对靶器官的影响。

实验

三、半数致死量测定

[实验目的]掌握灌胃染毒的方法； 学习掌握测定外源化合物半数致死量（LD50）测定方法。

[实验材料]

实验动物：昆明种小鼠（雌雄各半）

实验药品：苦味酸酒精饱和液，亚硝酸钠

实验器材：灌胃器，电子称等

[实验方法]

1预试验

取小鼠8～10只，以2只为一组分成4～5组，选择组距较大的一系列剂量，分别按组灌胃染毒亚硝酸钠溶液，找出引起0%死亡率和100％死亡率剂量的所在范围。

2正式试验

在预初验所获得的0%和100%致死量的范围内，选用几个剂量，每组10只小鼠完成动物分组和剂量计算后灌胃染毒。

3LD50测定中应观察纪录的项目

⑴实验要素：实验题目，实验日期，药物的批号等。

⑵给药后各种反应：死前的现象，各组死亡的只数等。

4 实验结果计算

实验完毕后，清点各组死亡鼠数和算出死亡率（P），按改良寇氏法公式进行计算：

LD50= ㏒ -1[Xm –i (∑P – 0.5)]

其中：

Xm：最大剂量的对数值

i ：相邻两组剂量对数值之差

P：各组动物死亡率

∑P：各组动物死亡率之总和

亚硝酸剂量：464（全死）、

215、100、46.4（死亡20%）mg/kg

参考剂量LD50：175mg/kg

蓄积毒性试验

蓄积毒性试验是评价外来化合物蓄积毒性的实验方法。常用的方法有：①蓄积系数实验法。②20天蓄积试验法，成年大鼠随机分为5组，每组10只，雌雄各半。各组剂量分别为LD50的1/20、1/

10、1/

5、1/2，另设溶剂对照组。每天灌胃一次，连续20天。然后观察7天。如1/20 LD50组已出现死亡，且各剂量组动物死亡呈剂量-反应关系，则受试动物有强蓄积毒性。如1/20 LD50组无死亡，但各剂量组死亡呈剂量-反应关系，表明有中等蓄积毒性。如1/20 LD50组无死亡，各剂量组死亡也剂量-反应关系，可认为无明显蓄积毒性。

致死剂量

1、半数致死量(median lethal dose，LD50) 较为简单的定义是指引起一群受试对象50%个体死亡所需的剂量。精确的定义指统计学上获得的，预计引起动物半数死亡的单一剂量。LD50的单位为mg/kg体重，LD50的数值越小，表示毒物的毒性越强；反之，LD50数值越大，毒物的毒性越低。与LD50概念相同的剂量单位还有半数致死浓度（LC50)和半数抑制浓度或半数失能浓度（IC50)。LC50 是指能引起一群受试对象50%个体死亡所需的浓度。IC50是指一种毒物能将某种酶活力抑制50%所需的浓度。毒理学最早用于评价急性毒性的指标就是死亡，因为死亡是各种化学物共同的、最严重的效应，它易于观察，不需特殊的检测设备。长期以来，急性致死毒性是

比较、衡量毒性大小的公认方法。在毒理学试验中，所需的实验动物数量是根据LD50不同的测定方法决定的。因为LD50并不是实验测得的某一剂量，而是根据不同剂量组而求得的数据。LD50在毒理中是最常用于表示化学物毒性分级的指标。因为剂量—反应关系的“S”型曲线在中段趋于直线，直线中点为50%，故LD50值最具有代表性。LD50值可受许多因素的影响，如动物种属和品系、性别、接触途径等，因此，表示LD50时，应注明动物种系和接触途径。雌雄动物应分别计算，并应有95%可信限。如受试物在液体中时，以半数致死浓度（median lethal

concentration，LC50）表示，单位为mg/L。LC50也用于表示空气中化学物的浓度，以mg/m3为表示单位。

2、绝对致死剂量（absolute lethal dose，LD100）：指某实验总体中引起一组受试动物全部死亡的最低剂量。实验总体中一组受试动物的数量视不同实验设计而定，少则10个，多则50～100个以上。

3、最小致死剂量（minimal lethal dose，MLD或MLC或LD01）：指某实验总体的一组受试动物中仅引起个别动物死亡的剂量，其低一档的剂量即不再引起动物死亡。

4、最大耐受剂量（maximal tolerance dose，MTD或LD0或LC0）：指某实验总体的一组受试动物中不引起动物死亡的最大剂量

微生物检验

实验一

目的：

1、掌握微生物检验工作中常用仪器设备的工作原理、使用方法、常见故障的排除和一般的维修技术。

2、了解微生物检验中精密仪器的使用方法及原理。

实验二

目的：

掌握用于微生物学检验的各种玻璃器皿(新购进的与培养过微生物的)的清洗要求和方法及试剂的配制方法。

实验三

目的：

1、掌握实验仪器设备、器材的使用方法；

2、掌握培养基、试剂的配置与灭菌方法。

第16篇：微生物总结

观察细菌的大小和形态，应选择适宜生长条件下的对数生长期为宜。 L form 细菌细胞壁缺陷型，细菌L型：细菌细胞壁的肽聚糖结构受到理化或者生物因素的直接破坏或合成被抑制，这种细胞壁受损的细菌在高渗环境下仍可存活者称为细菌细胞壁缺陷型。

细胞膜上与肽聚糖合成有关的酶类是青霉素作用的主要靶点，称青霉素结合蛋白（PBP）。 mesosome中介体：细菌部分细胞膜内陷、折叠、卷曲形成的囊状物称为中介体，有类似真核细胞纺锤丝和线粒体的作用。

obigate aerobe专性需氧菌：具有完整的呼吸酶体系，需要分子氧作为受氢体以完成需氧呼吸，仅能在有氧环境下生长，如结核分枝杆菌、铜绿假单胞菌。

微需氧菌：低氧分压（5%~6%）生长最好，氧浓度大于10%对其有抑制作用。如空肠弯曲菌、幽门螺杆菌

兼性厌氧菌：大多数病原菌属于此。

obigate anaerobe专性厌氧菌：缺乏完整的呼吸酶体系，利用氧以外的其他物质作为受氢体，只能在低氧分压或无氧环境中进行发酵，如破伤风梭菌、脆弱类杆菌。

细菌一般以简单的二分裂方式进行无性繁殖。

pyrogen热原质：又称致热原，是细菌合成的一种注入人体或动物体内能引起发热反应的物质。产生热原质的细菌大多是革兰氏阴性菌，热原质即其细胞壁的脂多糖。

exotoxin外毒素：是多数革兰阳性菌和少数革兰阴性菌在生长繁殖过程中释放到菌体外的蛋白质。

endotoxin内毒素：是革兰阴性菌细胞壁的脂多糖，菌体死亡崩解后游离出来。 toxoid类毒素：外毒素经0.3%～0.4%甲醛处理后，失去了毒性但仍保持免疫原性的生物制品。 侵袭性酶：某些细菌产生的能够损伤机体组织，促进细菌侵袭和扩散的物质，是细菌重要的致病物质。如产气荚膜杆菌的卵磷脂酶、A群链球菌的透明质酸酶等。 铜绿假单胞菌的色素是水溶性的，能使培养基和感染的浓汁呈绿色；金黄色葡萄球菌的色素脂溶性的，菌落显色，而培养基颜色不变。

antibiotic抗生素：某些微生物代谢过程中产生的一类能够抑制或杀死其他微生物或肿瘤细胞的物质。大多由放线菌和真菌产生，细菌产生的少。

bacteriocin细菌素：某些菌株产生的一类具有抗菌作用的蛋白质，其作用范围狭窄，仅对产生菌有亲源关系的细菌有杀伤作用。

液体培养基的三种生长状态：浑浊生长、沉淀生长、表面生长。

selective medium选择培养基：在培养基中加入某些化学物质，使之抑制某些细菌的生长而有利于另一些细菌生长，从而将后者从混杂的标本中分离出来，这种培养基称为选择培养基。 sterilization灭菌：杀灭物体上所有微生物的方法，包括杀灭细菌芽胞、病毒和真菌等在内的全部病原微生物和非病原微生物，经过灭菌的物体称为无菌物体。 disinfection消毒：杀死物体上或环境中的病原微生物并不一定杀死细菌芽孢或非病原微生物的方法。用以消毒的化学药品称为消毒剂。

antisepsis防腐：防止或抑制微生物生长繁殖的方法。细菌一般不死亡。 cleaning清洁：是指通过除去尘埃和一切污秽以减少微生物数量的过程。 asepsis无菌：是不存在活菌的意思，多是灭菌的结果。 干烤：171℃1小时

160℃2小时

巴氏消毒法：62℃30分钟，72℃30秒。

压力蒸汽灭菌法：超过标准大气压103.4kPa，121.3℃，维持15～20分钟。 紫外线以265~266nm最强。

plasmid质粒：是细菌染色体外的遗传物质，存在于细胞质中的环状闭合和线状的dsDNA，具有自我复制的能力，一个质粒即为一个复制体。

transformation转化：是受菌体直接摄取供菌体的DNA片段而获得新的遗传性状的过程。 conjugation接合：细菌通过性菌毛相互连接沟通，将遗传物质从供菌体转给受菌体的方式称为接合。

F质粒可整合到细菌的染色体上，引起宿主菌染色发生高频转移至F-菌，称为高频重组菌株。 transduction转导：是由噬菌体介导，将供体菌的DNA片段转入受体菌，使受体菌获得供体菌的部分遗传性状。

lysogenic conversion溶原性转换：某些细菌带有噬菌体基因后，基因型和性状发生改变，称为溶原性转换。

protoplast fusion原生质体融合：是将两种不同细菌经处理后失去细胞壁，置于高渗培养基中，保持原生质体的状态，混合后在融合剂作用下促使原生质体间的融合。 microeubiosis微生态平衡：机体内的正常微生物群在种类及数量方面了某种相互可接受的常态模式，同时正常微生物还与宿主之间存在相互依赖与相互制约的状态。这种状态始终处于动态过程中，称为微生物平衡。 microdysbosis微生物失调：指宿主、正常微生物群或外界环境等因素的变化打破了微生态平衡后的状态，最常见的是菌群失调。

normal flora正常菌群：是指正常寄居在宿主体内，对宿主无害而有利的微生物群的总称。 机会致病菌（opportunistic pathogen）=条件致病菌（conditioned pathogen）：有些细菌在正常情况下并不致病，只有在特定的情况下才可引起疾病，这类细菌称为机会致病菌和条件致病菌。

机会致病菌的情况主要有：

（一）正常菌群寄居部位改变

（二）宿主免疫功能低下

（三）菌群失调

dysbacteriosis菌群失调：在应用抗生素治疗感染性疾病的过程中，导致宿主某部位寄居细菌的种群发生改变或各种菌群的数量比例发生大幅度变化从而导致疾病称为菌群失调。

invasivene侵袭力：是指致病菌突破宿主皮肤、黏膜等生理屏障，进入机体并在体内定植和繁殖扩散的能力。

inappearent infection：当机体的抗感染免疫力较强，或侵入的细菌数量不多毒力较弱，感染后对机体损害较轻，不出现或出现不明显的临床症状，称为隐性感染，或称亚临床感染。 apparent infection：当机体抗感染的免疫力较弱，或侵入的致病菌数量较多毒力较强，以致机体的组织细胞受到不同程度的损害，生理功能也发生改变，出现一系列临床症状和体征，称为显性感染。

细菌全身感染的类型。

①toxemia毒血症：致病菌侵入宿主体内后，只在机体局部生长繁殖，病菌不进入血液循环，但其产生的外毒素入血。例如白喉，破伤风等。

②endotoxemia内毒素血症：革兰阴性菌侵入血流，并在其中大量繁殖、崩解后释放出大量内毒素，也可由病灶内大量革兰阴性菌死亡、释放的内毒素入血所致。

③bacteremia菌血症：致病菌由局部侵入血流，但未在血流中生长繁殖，只是短暂的一过性通过血液循环到达体内适宜部位后再进行繁殖而致病。例如伤寒早期有菌血症期。

④septicemia败血症：致病菌侵入血流后，在其中大量繁殖并产生毒性产物，引起全身性中毒症状，例如高热、皮肤和黏膜瘀斑、肝脾肿大等。如鼠疫耶尔森菌，炭疽芽胞杆菌等 ⑤pyemia浓毒血症：指化脓性病菌侵入血流后，在其中大量繁殖，并通过血流扩散至宿主体内的和其他组织或器官，产生新的化脓性病灶。例如金黄色葡萄球菌等。

artificial immunization人工主动免疫：是将抗原性物质（疫苗和类毒素）接种于人体，刺激机体免疫系统产生特异性免疫应答，从而对相应病原体感染产生特异性预防作用的措施。 subunit vaccine亚单位疫苗：能去除病原体中 与激发保护性免疫无关或有害的成分，但保留有效免疫原成分，能诱发机体产生免疫应答的疫苗，称为亚单位疫苗。

gene engineered vaccine基因工程疫苗：利用基因工程技术将编码病原体保护性抗原表位的目的基因导入原核和真核表达系统中表达、钝化后制成的疫苗，实际上也是一种亚单位疫苗。 nuclenic acid vaccine核酸疫苗：也称DNA疫苗。将编码保护性抗原的基因重组到质粒真核表达载体上，经肌肉注射或黏膜免疫等方法导入宿主体内，外源基因在体内所表达的抗原能够刺激机体产生免疫应答。

artificial paive immunization人工被动免疫：是输入含有特异性抗体的免疫血清、纯化免疫球蛋白抗体等免疫制剂，使机体立即获得免疫力的过程，可用于某些急性传染病的紧急预防和治疗。

SPA=葡萄球菌A蛋白：90%以上的金黄色葡萄球菌细胞壁存在的一种表面蛋白，是一种完全抗原，在体内SPA与IgGFc段特异性结合后所形成的复合物，具有抗吞噬、促细胞分裂、引起超敏反应、损伤血小板等多种生物活性。

coagulase凝固酶：大多数葡萄球菌致病病株能产生凝固酶，该酶能使液态的纤维蛋白原变成固态的纤维蛋白，也能使加有抗凝剂的人或兔血浆凝固，可作为鉴定致病性葡萄球菌的重要指标。

streptokinase,SK,链激酶：亦称链球菌溶纤维蛋白酶，能使血液中纤维蛋白酶原变成纤维蛋白酶，可溶解血块或阻止血浆凝固，有利于病菌在组织中扩散。

M蛋白：是A群链球菌的主要致病因子，含M蛋白的链球菌具有抗吞噬和抵抗吞噬细胞内杀菌作用的能力。

satellite phenomenon卫星现象：如将流感嗜血杆菌和金黄色葡萄球菌于血平板上共同培养时，在金黄色葡萄球菌菌落周围的流感嗜血杆菌菌落较大，离金黄色葡萄球菌菌落越远的越小，此现象称为卫星现象。这是由于金黄色葡萄球菌能合成较多的V因子，并弥散到培养基中，可促进流感嗜血杆菌的生长。该现象有助于流感嗜血杆菌的鉴定。

elementary body，EB,原体：衣原体在宿主细胞内生长繁殖形成的小而致密的颗粒结构，具有致病性。

reticulate body，RB,网状体：衣原体在宿主细胞内生长繁殖形成的大而疏松的结构。

necleocapsid核衣壳：是病毒的基本结构，由核心和衣壳构成。 核衣壳外有包膜和包膜构成成分刺突

有包膜的病毒称为包膜病毒（enveloped virus） 无包膜的病毒称为裸露病毒（naked virus）

viral attachment protein，VAP，病毒吸附蛋白：能与宿主细胞表面受体结合的蛋白称为病毒吸附蛋白。VAP与受体的相互作用决定了病毒感染的组织亲嗜性，如与红细胞结合的VAP称为血凝素。

具有血凝素的病毒能用凝集红细胞，呈血凝现象，这种现象能被相应的抗体抑制，称血凝抑制。其原理是相应抗体与病毒结合后，抑制了病毒表面的血凝素与红细胞结合。

abortive infection顿挫感染：病毒进入宿主细胞后，不能组装和释放出有感染性的病毒颗粒，称为顿挫感染。

defective virus缺陷病毒：因病毒基因组不完整或因某一基因位点改变不能进行正常增值，复制不出完整的有感染性病毒颗粒，此病毒称为缺陷病毒。

interference干扰现象：两个病毒感染同一细胞时，可发生一种病毒抑制另一种病毒增殖的现象称为干扰现象。

持续性病毒感染有以下三种类型。

1.潜伏感染（latent infection）

某些病毒在显性和隐性感染后，病毒基因存在细胞内，有的病毒潜伏于某些组织器官而不复制，比如疱疹病毒属的全部病毒。凡使机体免疫力下降的因素均可激活这些潜伏的病毒感染复发。

2.慢性感染 （chronic infection）

病毒在显性或隐性感染后未完全清除，血中可持续检测出病毒，因而可经输血、注射而传播，例如乙型肝炎，丙型肝炎。

3.慢性病毒感染（show virus infection）

指显性和隐性感染后，病毒有很长的潜伏期可达数月、数年甚至数十年，在症状出现后呈进行性加重，最终导致死亡。如HIV、麻疹病毒、狂犬病病毒及朊粒感染引起的的疾病等。

horizontal transmiion水平传播：是指病毒在人群不同个体之间的传播，也包括种动物到动物再到人的传播，为大多数病毒的传播方式。 vertical infection垂直传播：是病毒由宿主的亲代传给子代的传播方式，主要通过胎盘或产道传播。

replication cycle复制周期：从病毒进入宿主细胞开始，经过基因组复制，到最后释放出一个子代病毒，称为一个复制周期。

cytocidal effect杀细胞效应：病毒在宿主细胞内容复制完毕，可在很短时间内一次释放大量子代病毒病毒，细胞被裂解而死亡。

在体外实验中通过细胞培养和接种杀细胞性病毒，经一定时间后，可用显微镜观察到细胞变圆、坏死，从瓶壁脱落等现象，称为细胞病变作用（cytopathic effect，CPE）

interferon，IFN干扰素：病毒等物质诱导细胞产生的一种糖蛋白，具有抗病毒、抗肿瘤和免疫调节等功能。干扰素只能抑制病毒而无杀灭病毒的作用，其抗病毒作用具有相对的种属特异性。

细胞培养法是病毒分离鉴定中最常用的方法。

antigentic shift抗原性转变：自然流行条件下，甲型流感病毒的HA或NA的抗原性发生大幅度的变异，或者由于两种或两种以上甲型流感病毒感染同一细胞发生基因重组，形成新的亚型，属于质变，可引起流感的大流行。 antigentic drift抗原性漂移：

流感病毒亚型内部经常发生的抗原构构（HA或NA）的小变异，属于量变，易引起小规模的

流感流行。

柯萨奇病毒A16和新肠道病毒71型是引起手足口病的主要病原体。

A组轮状病毒感染是引起6个月～2岁婴幼儿严重胃肠炎的主要病原体，占病毒性胃肠炎的80%以上，是导致婴儿死亡的主要原因。轮状病毒传染源是患者和无症状带毒者，主要通过粪-口途径传播，在我国常被称为“秋季腹泻”。

gp120：为HIV的表面糖蛋白，与靶细胞表面的受体结合决定病毒的亲嗜性，同时也携带中和抗原表位，诱导体内中和抗体的产生。gp120易发生变异，有利于病毒逃逸免疫清除。 gp41：为跨膜糖蛋白，介导病毒包膜与宿主细胞膜的融合。

Negri body内基小体：狂犬病病毒在易感动物或人的中枢神经细胞中增殖时，可在细胞浆中形成一个或多个、圆形或椭圆形、直径为20～30nm的嗜酸性包涵体，称内基小体。可以作为辅助诊断狂犬病的指标。

prion朊粒：又称朊病毒，是一种由宿主细胞基因编码的、构象异常的蛋白质，不含核酸，具有自我复制能力和传染性。朊粒是人和动物传染性海绵状脑病的病原体。

人为唯一宿主的病原：脑膜炎瑟菌（流脑病原），淋病奈瑟菌，霍乱肠毒素，梅毒螺旋体，风疹，腮腺炎病毒，VZV（水痘-带状疱疹病毒），人巨细胞病毒

革兰阴性菌的外膜由脂蛋白、脂质双层和脂多糖三部分组成。脂多糖由脂质A、核心多糖和特异多糖三部分组成，即革兰阴性菌的内毒素。不同种属细菌的脂质A骨架基本相同，脂质A是内毒素的毒性和生物学活性的主要组分，无种属特异性。核心多糖位于脂质A的外层，有属特异性，同一属细菌的核心多糖相同。特异多糖是脂多糖的最外层，即革兰阳性菌的菌体O抗原，具有种特异性。

革兰染色法：标本经固定后，先用碱性染料结晶紫初染，再加碘液媒染，使之生成结晶紫-碘复合物，此时的细菌均被染成深紫色。然后用95%乙醇脱色，有些细菌被脱色，有些不能。最后用稀释复红或沙黄复染，此法可将细菌分为两大类：不被乙醇脱色仍保留紫色者为革兰阳性菌，被乙醇脱色后复染成红色者为革兰阴性菌。革兰染色法在鉴别细菌、选择抗菌药物、研究细菌致病性等方面具有重要的意义。 染色原理: 1革兰阳性菌细胞壁结构比较致密，肽聚糖层厚,脂质含量少,乙醇不易透过;革兰阴性菌细胞壁结构比较疏松,肽聚糖层薄,含大量脂质,乙醇易渗入;2.革兰阳性菌等电点比革兰阴性菌低：在相同pH条件下,革兰阳性菌所带负电荷要多,故与带正电荷的结晶紫染料结合较牢靠,不易脱色;3.革兰阳性菌菌体含大量核糖核酸镁盐,可与结晶紫-碘复合物牢固结合,使已着色的细菌不被乙醇脱色;革兰阴性菌则易被脱色。

医学意义①鉴别细菌②选择抗菌药物③研究细菌致病性

细菌的特殊结构及其医学意义：

capsule荚膜：某些细菌在其细胞壁外包绕一层黏液性物质，为多糖或蛋白质的多聚体，用理化方法去除后并不影响菌体的生命活动。

功能：①抗吞噬作用②黏附作用③抗有害物质的损伤作用 flagellum鞭毛：菌体上附有的细长并呈波浪弯曲状的丝状物

①是细菌的运动器官②具有高度的抗原性，称为鞭毛H抗原③某些细菌鞭毛与致病性有关④可用于细菌的分类与鉴定

pilus=fimbrise菌毛：许多革兰阴性菌和少数革兰阳性菌菌体表面存在的一种直的、比鞭毛更细更短的丝状物，称为菌毛。

作用①菌毛蛋白具有抗原性②普通菌毛是细菌的黏附结构，与致病性有关③性菌毛通过接合的方式传递细菌的致育性、毒力和耐药性。

spore芽胞：革兰阳性菌在菌体内部形成的一个圆形或卵圆形的小体，是细菌的休眠形式。芽胞杆菌属（炭疽芽胞杆菌）和梭菌属（破伤风梭菌、产气荚膜梭菌、肉毒梭菌）是主要形成芽胞的细菌。

医学意义①抵抗力强②是某些外源性感染的重要来源③杀死细菌的芽胞是判断灭菌效果的指标④可用于细菌的鉴别

细菌的群体生长繁殖可分为四期

1.迟缓期：细菌进入新环境后的短暂适应阶段，一般为1～4小时。该期菌体增大，代谢活跃，为细菌的分裂增殖合成并储存储备充足的酶和能量，但分裂迟缓，繁殖极少。

2.对数期：在培养后的8～18小时。该期细菌分裂增殖迅速，活菌数呈对数直线上升。此期细菌的形态、染色性、生理活性等较典型，对外界环境因素及抗生素敏感。常用此期细菌来研究其各种性状。

3.稳定期：由于培养基中营养物消耗，有害代谢产物积聚，该期细菌繁殖速度减慢，繁殖数与死亡数接近，故该期的活菌素大致恒定。细菌形态、染色性和生理性状在稳定期常有改变，细菌的外毒素、抗生素及芽孢等多在此期形成。

4.衰亡期：死菌数超过活菌数，为营养物质耗竭，代谢废物积聚所致。此期细菌形态显著改变，出现衰退型和菌体自溶，难以辨认；生理代谢活动也趋于停滞。

耐药性亦称抗药性，是指细菌对某抗菌抗（抗生素和消毒剂）的相对抵抗性。

现在的细菌耐药具有如下特点：耐药性形成快，细菌耐药谱广，细菌耐药性传播速度快，耐药强度高。

细菌耐药性的遗传机制

（一）固有耐药性

亦称天然耐药性，细菌对某些抗菌药物的天然不敏感，具有典型的种属特异性。

（二）获得耐药性

指细菌DNA的改变导致其获得了耐药性表型。耐药性细菌的耐药基因来源于基因突变或获得新基因，作用方式为接合、转导或转化。

1.染色体突变：细菌群体自发产生频率很低的随机突变，有些突变可赋予细菌耐药性。2.可遗传的耐药性：耐药基因能在质粒、转座子和整合子，可移动的遗传元件介导下进行转移并传播。

（三）多重耐药菌性

指细菌同时对多种作用机制不同和结构完全各异的抗菌药物具有耐药性。对三类或三类以上抗菌药物同时耐药的病原菌称为多重耐药菌。 细菌耐药性的生化机制

（一）钝化酶的产生

（二）药物作用靶位的改变

（三）抗菌药物的渗透障碍

（四）主动外排机制

（五）细菌生物被膜作用及其他

正常菌群的作用

1.生物拮抗：正常菌群在宿主体内的正常寄居可以妨碍或抵御致病微生物的入侵和繁殖，对宿主起着保护作用

2.营养作用：正常菌群在宿主体内可以促进营养物质的转化、吸收和利用，甚至合成一些宿主自己不能合成的物质供宿主使用

3.免疫作用：正常菌群作为抗原可促进宿主免疫器官的发育，刺激免疫系统的成熟与免疫应答

4.抗衰老作用：肠道菌群能维持一个有利于机体健康的生态内环境，对人体的健康和长寿有益

5.抗肿瘤作用：肠道正常菌群产生多种酶，可降解肠道内水解酶或转变致癌物为无害物质

构成细菌毒力的物质基础主要包括侵袭力、毒素、体内诱生抗原、超抗原等。

感染是否发生及发生后的转归取决于三方面的因素①机体的免疫状态②细菌因素，包括毒力、数量和侵入途径。③环境、社会因素的影响。

SPA及其在微生物检测中的应用

90%以上金黄色葡萄球菌细胞壁表面存在SPA蛋白质。SPA为完全抗原，能与人及多种哺乳动物的IgG

1、IgG

2、IgG4分子Fc段非特异性结合，结合后的IgG分子Fab段仍能与抗原特异结合。利用此原理建立的协同凝集实验已经广泛应用于多种微生物抗原检测。在体内，SPA与IgG结合后所形成的复合物还具有抗吞噬、促细胞分裂、引起超敏反应、损伤血小板等多种生物活性。

协同凝集实验：将针对可溶性抗原的IgG抗体与葡萄球菌（SPA）结合，然后加入待测样本，若样本中含有相应的可溶性抗原，则抗原抗体结合，使葡萄球菌聚集，出现凝集现象。 肠杆菌科

大肠埃希菌——O、H、K抗原 沙门菌属——O、H、Vi抗原 志贺菌属=痢疾杆菌

结核分枝杆菌致病作用主要靠菌体成分，特别是细胞壁中所含的大量脂质。 1脂质

①磷脂：能够刺激单核细胞增生，并可抑制蛋白酶的分解作用，使病灶组织溶解不完全，形成结核结节和干酪样坏死。

②分枝菌酸：在脂质中比重较大，与分支杆菌的抗酸性有关。（齐-尼抗酸染色）

③蜡质D：细胞壁中的主要成分，是一种肽聚酯与分枝菌酸的复合物，能引起迟发型超敏反应，并具有佐剂作用。

④硫酸脑苷酯和硫酸多酰基化海藻糖：存在与结核分枝杆菌毒株细胞壁中，能抑制吞噬细胞中吞噬体与溶酶体融合，使结核分枝杆菌在细胞里存活。

2.蛋白质：最重要的是结核菌素，它与蜡质D结合能引起较强的迟发型超敏反应。3.多糖：可使中性粒细胞增多，引起局部病灶细胞浸润。

4.核酸：rRNA是该菌的免疫原之一，能刺激机体产生特异性细胞免疫。

5.荚膜：结核分枝杆菌荚膜的主要成分为多糖，部分脂质和蛋白质。荚膜对结核分枝杆菌有一定的保护作用，主要包括：①荚膜能与吞噬细胞表面的补体受体3结合，有助于结核分枝杆菌在宿主细胞上的黏附与入侵；②黏膜中有多种酶可降解宿主组织中的大分子物质，供入侵的结核分枝杆菌繁殖所需的营养；③荚膜能防止宿主的有害物质进入结核分枝杆菌。

破伤风梭菌感染的重要条件是伤口需形成厌氧微环境：伤口在窄而深（如刺伤），伴有泥土或异物污染；大面积创伤、烧伤，坏死组织多，局部组织缺血；同时伴有需氧菌或兼性厌氧菌混合感染。

防治原则1.非特异性防治措施：正确处理创口，及时清创扩创，防止厌氧微环境的形成。 2.特异性预防措施：①使用含有百日咳疫苗、白喉类毒素和破伤风类毒素的百白破三联疫苗制剂对3~6月儿童进行免疫。②对伤口污染严重而未经基础免疫者，可立即注射破伤风抗毒素（TAT）以获得被动免疫作紧急预防。

3.特异性治疗：对已发病者应早期足量使用TAT。注射前必须先做皮试实验，测试有无超敏反应。必要时可采用脱敏注射法或用人抗破伤风免疫球蛋白。抗菌治疗可采用红霉素。 结核菌素实验

原理：人类感染结核分枝杆菌后，产生免疫力的同时也会发生迟发型超敏反应。将一定量的结核菌素注入体内，如受试者曾感染结核分枝杆菌，则在注射部位出现迟发型超敏反应炎症，判为阳性，未感染结核分枝杆菌的则为阴性。 结果分析：阳性反应表明机体已感染过结核分枝杆菌和卡介苗接种成功，对结核分枝杆菌有迟发型超敏反应，并说明有特异性免疫力。强阳性反应则表明可能有活动性肺结核，尤其是婴儿。

阴性反应表明受试者可能未感染过结核分枝杆菌和未接种卡介苗。发生阴性反应还可能的原因：①受试者处于原发感染早期，超敏反应尚未产生②受试者正患严重的结核病如全身粟粒性结核和结核性脑膜炎时，机体无反应能力③受试者患其他严重疾病导致细胞免疫功能低下，如艾滋病患者、肿瘤患者或用过免疫抑制剂者。

运用：①诊断婴幼儿的结核病；②测定接种卡介苗后免疫效果；③在未接种卡介苗的人群中进行结核分枝杆菌感染的流行病学调查；④用于测定肿瘤患者的细胞免疫功能。

Widal test 肥达实验：是用已知伤寒沙门菌菌体O抗原和鞭毛H抗原以及引起副伤寒的甲型副伤寒沙门菌、肖氏沙门菌和希氏沙门菌鞭毛H抗原的诊断菌液与受检血清作试管和微孔板定量凝集试验，测定受检血清中有无相应抗体及其效价的实验。

1.正常值：一般是伤寒沙门菌O凝集效价小于1：80，H凝集效价小于1：160，引起副伤寒的沙门菌H效价小于1：80。只有当检测结果等于或大于上述相应数值时才有诊断意义。 2：动态观察：若效价逐次递增或恢复期效价比初次效价≥4倍者即有诊断意义。 3.O与H抗体的诊断意义：

O、H凝集效价均超过正常值，则肠热症的可能性大；如两者均低，患者可能性小；若O不高H高，则有可能是预防接种或非特异性回忆反应；如O高H不高，则可能是感染早期或与伤寒沙门菌O抗原有交叉反应的其他沙门菌感染。 少数病例在整个病程中，肥达实验始终在正常范围内。

获得性（后天性）梅毒临床上分为三期，表现为发作、潜伏和再发作交替的现象。

I期：梅毒螺旋体经皮肤粘膜感染后2～10周，局部出现无痛性硬下疳，多见于外生殖器。此期传染性极强，经2～3个月无症状的潜伏期后进入第二期。

II期：全身皮肤的粘膜出现梅毒疹，全身淋巴结肿大，有时亦累及骨、关节、眼及中枢神经系统。此期传染性强，但破坏性较小。

III期：也称晚期梅毒，多发生于初次感染2年后，也可见潜伏期长达10～15年的病人。此期病变波及全身组织和器官，常见病变为慢性肉芽肿，局部组织因缺血而坏死，皮肤、肝、脾和骨骼可被累及，导致出现动脉瘤、脊髓痨或全身麻痹等，此期传染性小，但破坏性大。

病毒体的结构

病毒体的基本结构是由核心和衣壳构成的核衣壳。①核心位于病毒体的中心，主要成分为DNA或RNA，构成病毒基因组。除核酸外，还可能有少量病毒非结构蛋白，如病毒核酸多聚酶、转录酶或逆转录酶等。②衣壳是包绕在核酸外面的蛋白质外壳，具有抗原性，是病毒体的主要抗原成分。衣壳是由多肽构成的一定数量的壳粒按螺旋对称、二十面体对称或复合对称的方式排列组成。

核衣壳外可有包膜和包膜构成成分刺突。包膜是包绕在病毒核衣壳外面的双层膜，是某些病毒在成熟过程中穿过宿主细胞以出芽方式释放时获得的，含有宿主细胞膜和核膜成分。刺突的化学成分是糖蛋白。某些包膜病毒在核衣壳外层和包膜内层之间有基质蛋白，其主要功能是把内部的核衣壳蛋白与包膜联系起来，此区域称为被膜。

干扰素是病毒等物质诱导细胞产生的一种糖蛋白，具有抗病毒、抗肿瘤和免疫调节等功能。 干扰素抗病毒机制：不能直接灭活病毒，而是通过诱导细胞合成多种抗病毒蛋白发挥效应。 干扰素的抗病毒作用特点：①广谱性②种属特异性③间接性④高活性。

正黏病毒=流感病毒

病毒体结构主要包括病毒核酸与蛋白组成的核衣壳和包膜。核衣壳由单负链RNA、RNA依赖的RNA聚合酶和核蛋白（NP）组成。核蛋白是主要的结构蛋白，抗原结构稳定与M蛋白一起决定病毒的型特异性，其抗体无中和病毒能力。

包膜有内层基质蛋白（MP）和外层脂蛋白（LP）组成。脂蛋白来自于宿主细胞膜。病毒体包膜上镶嵌有两种刺突：血凝素（HA）和神经氨酸酶（NA），它们的抗原结构很不稳定，易发生变异。

根据NP和MP的抗原性不同，流感病毒被分为甲乙丙三型。

根据病毒表面HA和NA抗原性的不同，甲型流感病毒又分为若干亚型。H7N9，H就代表血凝素，N就代表神经氨酸酶。

流感病毒易于发生抗原性变异、温度敏感性变异等。抗原性变异是流感病毒变异的主要形式，病毒表面抗原HA和NA是主要的变异成分。流感病毒的抗原性变异包括抗原性转变和抗原性漂移两种形式。

抗原性转变：在自然流行条件下，甲型流感病毒的HA或NA的抗原性发生大幅度的变异，或者由于两种或两种以上甲型流感病毒感染同一细胞时发生基因重组，形成新的亚型。属于质变，人群普遍对变异病毒株缺乏免疫力而易感，可引起流感的大流行。

抗原性漂移：流感病毒亚型内部经常发生的抗原结构（HA或NA）的小变异，通常由病毒基因点突变和人群免疫力选择性降低引起。属于量变，易于发生小规模的流感流行。

狂犬病防治原则：

通过对犬等动物进行预防接种、严格管理以及捕杀野犬等措施，可有效地降低狂犬病的发病率。开展人群预防接种是预防狂犬病的关键。

（一）处理伤口：人被可疑患病动物咬伤后应立即对伤口进行处理，可用清水、肥皂水等充分清洗伤口，伤口较深者应对伤口深部进行灌流清洗，再用75%乙醇和碘酊涂擦消毒。

（二）主动免疫：①暴露后预防接种

人被狂犬病毒感染后，及时接种狂犬病病毒灭活疫苗，分别于第0、

3、

7、14和28天进行肌肉注射。②暴露前预防接种

接种对象主要是长期接触家畜、野生动物或者进行狂犬病病毒研究的高危人群。

（三）被动免疫：在伤口严重等特殊情况下，应联合使用人抗狂犬病免疫球蛋白或马抗狂犬病血清进行被动免疫，必要时需联合使用干扰素以增强保护效果。

可疑狂犬咬伤后，应采取何种预防措施？

（一）处理伤口：人被可疑狂犬咬伤后应立即对伤口进行处理，可用清水、肥皂水等充分清洗伤口，伤口较深者应对伤口深部进行灌流清洗，再用75%乙醇和碘酊涂擦消毒。

（二）暴露后预防接种：

及时接种狂犬病病毒灭活疫苗，分别于第0、

3、

7、14和28天进行肌肉注射。

（三）被动免疫：在伤口严重等特殊情况下，应联合使用人抗狂犬病免疫球蛋白或马抗狂犬病血清进行被动免疫，必要时需联合使用干扰素以增强保护效果。

第17篇：微生物总结

第一章、绪论

巴斯得的贡献：

1、彻底否定了“自生说”

2、免疫学—预防接种

3、证实发酵是由微生物引起的

3、巴斯德消毒法

柯赫贡献：

1、证实炭疽病菌是炭疽病的病原菌

2、发现了肺结核病的病原菌

3、提出了证明某种微生物是否为某种疾病病原体的病原菌——柯赫原则

4、固体培养基分离纯化微生物的技术

5、配制培养基

微生物的5大共性：

1、体积小、面积大

2、吸收多、转化快

3生长旺、繁殖快

4、分布广、种类多

5、适应性强、易变异 第二章、微生物的纯培养和显微技术

一、涂布平板法作用：用于纯种分离、筛选菌落、得到单菌落，对一些细菌进行计数 五区划线发作用：纯化菌种、得到单菌落

摇瓶实验作用：菌种筛选、发酵实验、种子培养等 穿刺法的作用：保藏厌氧菌种、研究微生物的动力 之字划线法的作用：保藏菌种、单菌落的获取

二、斜面菌种保藏法：保藏期限3个月以内，

沙土管保藏法：保藏期限1~10年主要适用于产孢子的，如芽孢杆菌、放线菌 石蜡油封藏法：保藏期限1~2年

真空冷冻干燥法：保藏期限5~10年， 液氮超低温病结法：保藏期限5~10年 第三章

一、细胞壁：根据细胞壁将原核生物分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两种。

1、革兰氏阳性菌细胞壁的特点：厚度大（20~80nm）和化学组分简单，一般只含90%肽聚糖和10%磷壁酸。

革兰氏阳性菌的机械阻拦与保护作用有肽聚糖完成。 磷壁酸：是结合在革兰氏阳性菌细胞壁上的一种酸性多糖，主要成分为甘油磷酸或核糖醇磷酸。

磷壁酸为革兰氏阳性菌所特有。对于革兰氏阳性菌而言，抗原性由磷壁酸完成。 磷壁酸的主要生理功能：1）、其磷酸分子上较多的负电荷可提高细胞周围镁离子的浓度进入细胞后就可以保证细胞膜上一些需镁离子的合成提高活性 2）储藏磷元素 3）、增强某些致病菌如A族链球菌对宿主细胞的黏连、避免被白细胞吞噬以及补抗体的作用 4）赋予革兰氏阳性菌以特异的表面抗原 5）可作为噬菌体的特异性吸附受体

6）调节细胞自溶素的活力，借以防止细胞自溶而死亡

2、革兰氏阴性菌：由肽聚糖和外膜组成，外膜中的脂多糖是革兰氏阴性菌所特有的 外壁层可分为3层：外层为脂多糖层，中层为磷脂层，内层为脂蛋白 革兰氏阴性菌外膜的作用：1）控制细胞透性

2）提高镁离子浓度 3）决定细胞的抗原性

4）类脂A是类毒素的主要成分

脂多糖：是位于革兰氏阴性菌细胞壁最外层的一层较厚的类脂多糖物质，由类脂A、核心多糖和O-特异侧链

脂多糖的功能：1）其中类脂A是革兰氏阴性菌致病物质——内毒素的物质基础 2）因其负电荷较强，有吸附镁离子、钙离子等阳离子以提高其在细胞表面的浓度作用 3)由于LPS结构多变，决定了革兰氏阴性菌细胞表面抗原决定族 4）是许多噬菌体在在细胞表面的吸附受体 5）具有控制某些物质进出细胞的部分选择性屏障功能

3、革兰氏染色机制：通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细胞膜内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物。革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚，肽聚糖网层次多和交联致密，故与乙醇与丙酮作脱色处理时因失水反而使网孔缩小，再加上它不含类脂，故乙醇处理不会溶出缝隙，因此能把结晶紫与碘的复合物牢牢留在壁内，使其任呈紫色。反之革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层的类脂含量高、肽聚糖层薄和交联度差，遇脱色剂后，以类脂为主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘的复合物的溶出，因此，通过乙醇脱色后细胞退成无色。这时，再经沙黄等红色染料进行复染，就使革兰氏阴性菌呈现红色，而革兰氏阳性则保留紫色。

二、芽孢

芽孢：某些细胞在生长发育后期，在细胞内形成一个圆形或椭圆形、厚壁、含水量极低、抗逆性极强的休眠体

芽孢的特点：1）芽孢内新陈代谢几乎停止，处于休眠状态，但保持潜在萌发力

2）芽孢不具生殖能力，仅只是一种休眠体 3）抗逆性最强的生命体之一，有抗热、抗化学药物、抗辐射和抗静水压能力 4）含水量低，壁厚而致密，通透性差，不易着色，折光性强

5）一个孢子萌发只产生一个营养状态的细胞 芽孢的耐热机制：芽孢的耐热性在于芽孢衣对多价阳离子和水分的透性很差和皮层的离子强度很高，从而是皮层产生极高的渗透压去夺取芽孢核心中的水分，其结果造成皮层的充分膨胀，而核心部分的细胞质却变得高度失水，因此，导致核心具极强的耐热性。 第四章微生物的营养要求

一、营养物质：能够满足微生物机体生长、繁殖和完成各种生理条件所需的物质 营养：微生物获得U和利用营养物质的过程

二、

1、碳源：是在微生物生长过程中为微生物提供碳素来源的物质。为微生物提供碳元素与能量

2、氮源：为微生物提供氮元素来源，只有少数自养微生物能利用铵盐、硝酸盐同时作为氮源与能源（是构成细胞中核酸和蛋白质的重要元素）氮源的类型：无机氮、有机氮、气体氮

3、无机盐：作用：作为酶活性中心的组成部分、维持生物大分子和细胞结构的稳定性、调节并维持细胞的渗透压、控制细胞的氧化还原电位和作为某些微生物生长的能源物质。

4、生长因子：通常是指那些微生物生长所必需的的且需量很少，但微生物自身不能合成或合成量不足以满足机体生长需要的有机化合物

5、水：生理功能：1)起到溶剂与运输介质的作用

2）参与细胞内一系列的化学反应

3）维持蛋白质、核酸等生物大分子稳定的天然构象

4）是良好的导热体，调节细胞温度 微生物的营养类型分类（P84表格）

三、

1、培养基的配制原则：1）目标明确

2）营养协调

3）物理化学条件适宜

4）原料来源的选择

2、

C多有助于次生物质分泌，N多有助于个体生长发育

3、PH：细菌：7.0~8.0

酵母菌：4.0~6.0

放线菌：8.0~9.0

霉菌：4.0~5.8

4、维持培养基PH的方法：1）加缓冲剂一氢和二氢磷酸盐的混合物

2）备用碱：CaCO

3、CaHCO3 3）弱酸盐：柠檬酸盐、乳酸盐

4）液氨或盐酸

5、原料来源：1）经济节约原则：以粗代精、以废代好、以简代繁

2）原料来源要广泛

3）原料药易处理、处理成本要低

4）原料处理后废物、废液、废气要少

6、选择和配制培养基的方法四种：生态模拟、查阅文献、精心设计、实验比较

四、培养基的分类

1、按成分不同划分：天然培养基：优点为取材方便，营养丰富，种了多样，配制方便合成培养基：优点：组分精确，重复性好确定：较昂贵，一般用于研究

2、根据物料状态划分：固体培养基：一般用于进行微生物的分离、鉴定、活菌计数及菌种保藏半固体培养基：用于观察微生物的运动特征、分类鉴定及噬菌体效价滴定液体培养基：用于大量培养微生物，研究生理代谢

3、按用途划分：基础培养基：用于培养野生型微生物和原养型微生物 加富培养基（营养培养基）：在基础培养基中加入某些特殊营养物质制成的一类营养丰富的培养基作用一般为分离某种微生物而专门设计或培养营养要求严谨的异样微生物 鉴别培养基：在培养可中加入某种特殊化学物质 选择培养基：根据不同种类微生物的特殊营养需求或对某种化学物质的敏感性不同，在培养基中加入相应的特殊营养物质或化学物质，抑制不需要的微生物的生长，有利于所需要微生物的生长，有利于所需微生物的生长 第五章、微生物代谢

微生物发酵过程的三个阶段：脱氢（电子）、递氢（或电子）和受氢（或电子） 发酵：是指微生物细胞将有机物氧化释放的电子直接交给底物本身未完全氧化的某些中间产物，同时释放能量并产生各种不同的代谢产物

代谢：生命存在的基本特征，是微生物体内所进行的全部生化反应的总称。主要由分解代谢和合成代谢两个过程组成。 分解代谢：是指将大分子物质降解成小分子物质，并在这个过程中产生能量（都是氧化反应） 合成代谢：是指细胞利用简单的小分子物质合成复杂大分子，在这个过程要消耗能量（都是还原反应）

代谢途径都是有一系列连续的酶促反应构成的

P102~P105EMP HM ED途径的特点功能以及途径路线

根据氧化还原反应电子受体的不同可将发酵和呼吸分为有氧和无氧呼吸两种 P108 TCA途径图

TCA循环特点：1）氧虽然不直接参与其中反应，但必需在有氧条件下运行

2）每个丙酮酸产生15个ATP 3）位于一切分解代谢与合成代谢的枢纽地位，可为生物合成提供各种碳价原料

TCA的生理意义：1）为细胞提供能量

2）各种能源物质彻底氧化的共同代谢途径（对于微生物来说） 3）物质转化枢纽

无氧呼吸：电子受体不是氧气而是外源无机物与部分简单小分子有机物

发酵作用：没有外源电子受体，底物具有的能量只释放一小部分，合成少量ATP 三种磷酸化：底物水平磷酸化，高能磷酸化，氧化磷酸化

光合磷酸化的特点：1）光驱使下电子自菌绿素上逐出后经类似呼吸链又回到菌绿素

2）产还原力[H]和产ATP分别进行，还原力来自于H2O等无机物

3）不产生氧气 合成代谢：微生物利用能量代谢所产生的能量、中间代谢产物以及从外界吸收的小分子合成复杂细胞物质的过程

P118~P119 CO2固定路线图

蓝细菌孤单的抗氧化保护机制：1）分化出特殊的还原性异形胞

2）非异形胞蓝细菌固氮酶的保护将固氮与光合进行时间上分隔

微生物固氮反应6要素：1）ATP的供应

2)还原力[H]及传递氢载体

3）固氮酶

4）还原底物——氮气

5）镁离子

6）严格厌氧微环境

联合固氮菌：指必需生活在植物根茎叶，动物肠道等处才能进行固氮的微生物，不形成类似根瘤的共生结构 微生物的代谢调节主要有两种类型：一是酶活性的调节，即调节已经存在的酶分子的活性，是酶在化学水平的变化。另一类是酶合成的调节，即调节酶分子的合成量，是遗传水平发生的变化 第六章

一、生长曲线延滞期

特点：1）生长速率常数为零，细胞数目不增加或增加很小

2）细胞形态变大或 增长许多杆菌可长成丝状

3）合成代谢十分活跃，核糖体、酶类和ATP 的合成加速产生各种诱导酶

4）对外界不良条件如NaCl溶液，温度和抗 生素等理化因素反应敏感

出现原因：1）微生物接种到一个新的环境，暂缺乏足够的能量和必需的生长因子

2）“种子”老化即处于未对数期或种子未活化

3）接种时损伤

影响其长短的因素与实践意义：1）接种龄：对数期种子延滞期短，延滞期或衰亡期的种子延滞期较长

2）接种量：接种量大，延滞期较短，接种量小，延滞期较长

3）培养基成分：培养基成分丰富的延滞期较短，培养基成分与种子培养基一致的延滞期较短

二、生长曲线指数期

特点：1）生长速率最快，细胞呈指数增长

2）生长速率恒定

3）代谢旺盛，细胞组分平衡发展

4）群体的生理特性一致

影响指数期的意义：1）菌种：不同菌种代时差异极大

2）营养成分：营养越丰富代时越短

3）营养物浓度：影响微生物的生长速率和生长总量

4）培养温度：影响微生物的生长速率和生长总量

指数期的实践意义：1）是代谢、生理研究的良好材料

2)是增殖噬菌体的最适宿主菌龄

4）革兰氏染色是采用此期微生物

生长曲线稳定期特点：1）活细胞总数维持不变即新增殖的细胞数与衰亡的细胞数相等，菌体总数达到最高点

2）细胞生长速率为零

3）细胞生理上处于衰老，代谢活力钝化，细胞成分合成缓慢，革兰氏染色发生变化

三、生长曲线衰亡期

特点：细胞以指数速率死亡，有时细胞速率的降低是由于抗性细胞的积累，细胞变形退化，有的发生自溶，革兰氏染色发生变化

影响衰亡期的因素及实践意义：1）与菌种的遗传特性有关：有些细菌的培养经历所有的各个生长时期，几天以后死亡，有细菌培养基个月乃至几年以后任然有一些货细胞

2）与是否产芽孢有关：产芽孢的细菌更易幸存下来

3）与营养物质和有毒物质有关：补充营养和能源，以及中和环境毒性，可以减缓死亡细胞的死亡速率，延长细菌培养物的存货时间

四、分批培养：是指将微生物置于一定容积的的培养基中，经过生长培养，最后一次收获培养方式 连续培养：在一个恒定容积的的流动系统中培养微生物，一方面以一定速率加入新的培养基，另一方面又以相同的速率流出培养物（菌体和代谢产物）

连续发酵的优点：1）高效

2）产品质量较稳定

3）节约了大量动力、人力、水和蒸汽，且使水、汽、电的负荷均衡合理

连续发酵的缺点：1）菌种易退化

2）易污染杂菌 3）营养物质的利用率一般 同步生长：就是指在培养物中所有微生物细胞都同一生长阶段，并都能同时分裂的生长方式 同步培养法包括诱导法与选择法

诱导法：是采用物理、化学一男子使微生物生长到某一阶段而停下来，使所有细菌都达到这个阶段时再使其生长 恒浊器：根据培养器内微生物的生长密度并借光电控制系统来控制培养液流速，以取得菌体密度高，生长速度恒定的微生物细胞的连续培养

恒化器：与恒浊器相反，是一种设法使培养液流速保持不变 最高生长速率条件下进行生长繁殖的一种连续培养装置 装置

控制对象

培养基

培养基流速

生长速率

产物

应用范围

恒浊器

菌体密度(内控制)

无限制生长因子

不恒定

最高速率

大量菌体或与菌体平行的代谢产物

生产为主

恒化器

培养基流速（外控制）

有限制生长因子

恒定

低于最高速率

不同生长速率的菌体

、并使微生物始终在低于其

实验室为主

五、防腐：是在某些化学物质或物理因子作用下防止或抑制微生物生长的一种措施，它能防止食物腐败或防止其他物质霉变 消毒：利用某种杀死或灭活物质或物体中所有微生物的一种措施，它可以起到防止感染或传播的作用

灭菌：利用某种方法杀死物体中包括芽孢在内的所有微生物的一种措施 第七章

1、病毒的特点:1)形态及其微小，一般能通过细菌滤器必须自电镜下才能观察

2）没有细胞构造，主要成分仅为核酸与蛋白质

3）每一种病毒致含有一种核酸

DNA和RNA 4）依靠自身的核酸进行复制，一病毒的核酸和蛋白质等原件实现装配，实现繁殖

5）严格细胞内寄生，缺乏完整的酶和产能系统，只能利用宿主细胞的现成的代谢系统合成病毒自身的核酸和蛋白质

6）在离体条件下，能以无生命力的大分子状态存在，并可长期保持器侵染力

7）对一般抗生素不敏感，但对干扰素敏感

8）有些病毒的基因可以整合到宿主的基因中去

2、病毒与活细胞的区别：1）结构简单，没有细胞结构

2）几乎所有的毒粒中只有DNA或RNA一种类型的核酸

3）在细胞外不能增殖

3、得到一步生长曲线的实验：二院培养系统：1）低浓度病毒宿主细胞(给几分钟时间侵染) 2）高倍稀释病毒与细胞的培养物

3）保湿培养

4）不同时间取样，涂布平板，得到效价

5）以时间为横坐标，病毒浓度为纵坐标绘图

4、烈性噬菌体：感染宿主后增殖裂解宿主 溶原性噬菌体（温和性细菌）：感染后大多数可整合到宿主基因中少数以染色体外独立存在

5、病毒分为真病毒和亚病毒，亚病毒又分为类病毒、卫星病毒、卫星RNA、朊病毒 类病毒：是一种只包含RNA的病毒，只在植物中出现，分质量极小，不能编码蛋白质 卫星病毒：寄生于与之无关的辅助病毒的基因产物的病毒 卫星RNA：是指必需依赖一些辅助病毒进行复制的小分子单链RNA，他们被包藏在辅助病毒的壳体中

朊病毒：是一类能引起哺乳动物亚急性海绵样脑病的病原因子 第八章

P204页Griffith转化实验等3个实验

基因组：是指位于细菌或细胞中的所有基因 大肠杆菌基因组的特点：1）遗传信息的连续性

2）功能相关的结构基因组成操纵子结构

3）结构基因的单拷贝及rRNA基因的多拷贝

4）基因组重复序列少而短

质粒：是一种独立于染色体外，能进行自主复制的细胞质遗传因子，主要存在于各种微生物中

转座子：是位于染色体或质粒上的一种能改变自身位置的DNA序列，广泛分布于原核和真核细胞中

质粒的主要类型：致育因子、抗性因子、Col质粒、毒性质粒、代谢质粒、隐秘质粒

致育因子：又称F质粒，其大小约100kb，这是最早发现的一种与大肠杆菌的有性生殖现象（结合作用）有关的质粒

抗性因子：是另一类普遍而重要的质粒，主要包括抗药性和抗重金属两大类，简称R质粒 Col质粒：该质粒含有编码大肠菌素的基因，大肠菌素是一种细菌蛋白，只杀死近缘且不含Col质粒的菌株，而宿主不受其产生的细菌素的影响

毒性质粒：致病菌中携带的能引起致病性的质粒，这些质粒具有编码毒素的基因 代谢质粒：携带有能降解某些基质的酶的基因的质粒

隐秘质粒：不显示任何表型效应，它们的存在只有通过物理方法检测出来 原核生物中对的转座因子有3种类型：插入顺序（IS）、转座子（Tn）、病毒（Mu） 转座的遗传学效应：插入突变、产生染色体畸变、基因的移动和重排

基因突变：一个基因内部遗传结构或DNA序列的任何改变包括一对或几对碱基的缺失、插入或置换，而导致的遗传变化

碱基变化对遗传信息改变的四种类型：同义突变，错义突变，无义突变，移码突变 同义突变：是指某个碱基的变化没有改变产物氨基酸序列的密码子变化

错义突变：是指碱基序列的改变引起了产物氨基酸的改变（可能为致死突变） 无义突变：是指某个碱基的改变，使代表某种氨基酸的密码子变为蛋白质的合成的终止密码子，蛋白质的合成提前终止，产生短截的蛋白质

移码突变：由于DNA序列中发生1~2个核苷酸的缺失或插入，使翻译的阅读框发生改变，从而导致改变位置以后的氨基酸序列的完全变化（一般为致死突变）

表型变化的突变型：营养缺陷型，抗药性突变型，条件致死突变型，形态突变型 营养缺陷型：缺乏合成其生存所必需的营养物的突变型，只有从周围环境或培养基中获得这些营养或前体物才能生长 影印平板P218 抗药性突变型：是由于基因突变使菌株对某种或某几种药物，特别是抗生素产生抗性的一种突变型

条件致死突变型：是指在某一条件下具有致死效应，而在另一条件下没有致死效应的突变型 形态突变型：是指造成形态改变的突变型（包括菌落形态、颜色一件噬菌斑形态）

自发突变的缘由：1）NDA复制过程产生的错误

2）碱基互变异构体的相互转变

3）转座子的随机插入基因

自发突变的特性：1）非对应性

2）稀有性

3）规律性

4）独立性

5）遗传和回复

6）可诱变性

诱发突变：碱基类似物、插入染料、直接与DNA其化学反应的诱变剂、辐射和热、生物诱变因子

DNA损伤修复：光复活作用、切除修复、重组修复、SOS修复 光复活：由phr基因编码的光解酶进行

切除修复：又称暗修复，该修复系统除了碱基错误配对和单核苷酸插入不能修复外，几乎其他DNA损伤均可修复，是细胞内主要修复系统

重组修复：是一种越过损伤而进行的修复，这种修复不将损伤碱基除去

SOS修复：是DNA分子受到较大范围的重大损伤时诱导产生的一种应急反应 P226~227 高频重组菌等

转导：是由病毒介导的细胞间进行遗传交换的一种方式

供体DNA进入受体的命运：1）发生稳定的转导子

2）流产转导：即不被降解，又不被整合，也不被复制

3）外源DNA被降解，转导失败

遗传转化：是指同源或异源的游离DNA分子被自然或人工感受态细胞摄取，并得到表达的水平方向的基因转移过程

4个影响供体DNA与受体细胞间的最初相互作用：1）转化片段的大小

2）形态：双链DNA 3）浓度：在在临界值出现之前成正比

4）生理状态：感受器——刚停止DNA合成 微生物育种：诱变育种、代谢育种、体内基因组育种 代谢育种：改变代谢途径、扩展代谢途径、构建新的代谢途径 体内基因组育种：原生质体融合，杂交育种

融合子的判别：1）亲本遗传标记的互补的

2）亲本灭活后性状的恢复

3）具有双亲本的荧光标记 第九章

顺式作用元件：位于基因的旁侧，可以调控影响基因表达的核酸序列。其本身并不编码蛋白质

反式作用因子：通常为蛋白质或RNA，其特征是可以合成并扩散到目标场所发挥作用 正调控：控制因子通过与启动子原件结合来激活基因的表达 负调控：抑制物与操纵基因结合起来阻止基因表达 P248 操纵子的结构

P249图

P250 图

启动子：是RNA聚合酶和CAP的结合位点，控制着转录的起始，一个启动子可以启动多个基因的表达

操纵基因：DNA上的一个结合位点，阻抑物能与之结合抑制相邻启动子的起始转录，操纵基因不表达任何东西 终止子：控制转录结束

转录因子：转录起始过程中RNA聚合酶所需要的辅助因子

转录水平的调控:1）DNA的结构

2）RNA聚合酶的功能

3）蛋白质因子及其他小分子配基的相互作用

第18篇：微生物总结

微生物：一类分布广泛、体积微小、结构简单、肉眼直接看不到，微小生物的总称。

细菌L型：细菌细胞壁的肽聚糖结构受理化或生物因素直接破坏或合成被抑制，这种细胞壁受损的细菌在高渗环境下仍可存活，称细菌细胞壁缺陷型或L型。

质粒：是染色体外的遗传物质，控制某些特定的生物学性状，不是细菌生长所必需。

荚膜：是细菌合成分泌的包绕于细胞壁外的一层粘液性物质。界限清晰性质稳定结合牢固。 培养基：由人工方法经灭菌后制成，专供微生物生长使用的混合营养制品。一般pH为7.2-7.6。

兼性厌氧菌：兼有需氧呼吸和无氧发酵两种功能，无论在有氧或无氧环境中都能生长，但以有氧时生长较好，大多数病原菌属于此。 菌落：在固体培养基中，经过十八到24小时培养后，单个细菌分裂繁殖成一堆肉眼可见的细红细胞吸附：流感病毒等感染细胞后，由于细胞膜上出现了血凝素（HA），具有吸附脊椎动物红细胞的能力，这一现象称为红细胞吸附。 抗毒素：通常是用细菌类毒素给马多次注射后，取其免疫血清提取免疫球蛋白精制而成

抗生素：微生物来源的抗菌药物，以及人工化学修饰或半合成的衍生物

无菌：就是指没有活菌的意思。

1：细胞壁结构、化学组成及功能？答：化学组成：G+①肽聚糖：聚糖骨架、四肽侧链、五肽交联桥②磷壁酸：粘附功能，与致病性有关；抗原性很强③其他成分：如A群链球菌的M蛋白G-①肽聚糖：聚糖骨架；四肽侧链②外膜：脂蛋白；脂质双层；脂多糖：脂类A（毒性成分，无种属特异性）；核心多糖；特异多糖。 功能：①维持细菌固有形态②保护细菌抵抗低渗环境③物质交换④决定菌体的抗原性。 2：G-菌与G+菌细胞壁的异同点及其意义？答：兼性厌氧菌、专性厌氧菌。

11：与医学有关的合成代谢产物？答：① 毒素与侵袭性酶：外毒素和内毒素②热原质：G-菌细胞壁的脂多糖，耐高温，250℃干烤破坏。③抗生素：某些微生物代谢中产生的一类能抑制或杀死其他微生物或肿瘤细胞的物质。④维生素：如VitK、B族维生素。⑤色素：脂溶性和水溶性色素。⑥细菌素：无治疗应用价值。 13：病毒的形态、结构与化学组成。答：多数病毒呈球形或近似球形，少数呈杆状（植物病毒）、丝状（初分离的流感病毒）、弹状（狂犬病毒）、砖块状（如痘类病毒）和蝌蚪状（噬菌体）。病毒的核心和衣壳，二者构成核衣壳，病毒包膜和其他辅助结构。化学组成：核心：主要为核酸，化学组成为DNA或RNA。衣壳：包绕在核心外面的一层蛋白质，由许多蛋白质亚单位（壳粒）组成。 包膜：化学组成： 脂质蛋白质糖类。

答：单细胞真菌呈圆形或卵圆形。多细胞真菌

结构：菌丝和孢子，菌丝：分为营养菌丝、气中菌丝、生殖菌丝；孢子：是真菌的繁殖体。结构：细胞壁外成分；细胞壁；隔膜；其他结构。

25：真菌培养特性。答：最常用的培养:沙保弱培养基。温度:多数都在22 ~ 28oC，但深部感染真菌最适温度为37oC，pH4.0 ~ 6.0病原菌通常生长缓慢，1~4周。

26：真菌繁殖方式。答：①无性生殖：①由菌丝断裂形成新个体②细胞直接分裂产生子细胞③产生芽生孢子④产生孢子囊孢子和分生孢子②有性生殖：指经过两性细胞配合产生新个体的繁殖方式。

27：真菌抵抗力答：①对干燥、阳光、紫外线及常用消毒剂有强抵抗力②不耐热，菌丝与孢子60℃ 1小时均可杀死③2﹪石炭酸、10%甲醛、0.1%升汞、2.5%碘酊敏感④抗真菌药物：菌集团。

纯培养基：挑取一个菌落，移种到另一培养基中，生长出来的细菌均为纯种。

毒性噬菌体：在宿主菌细胞内噬菌体增殖产生子代噬菌体，宿主菌被裂解，形成溶菌性周期。 温和噬菌体：噬菌体基因与宿主菌染色体整合，成为前噬菌体，噬菌体DNA能随细菌DNA复制而复制，并随细菌的分裂而传到子代细菌的基因组中，变成溶原性细菌，形成溶原性周期。 前噬菌体：整合在细菌染色体上的噬菌体基因。 转座子：细菌基因组中的一段DNA序列，可以在染色体、质粒或噬菌体之间自行移动的遗传成分，伴随转座子的移动，会出现插入突变。 基因转移：遗传物质由供体菌转入受体菌的过程为基因转移。

重组：转移的基因与受体菌DNA整合在一起称为重组，重组使受体菌获得供体菌的某些性状。 转化：细菌通过性菌毛相互连接沟通，将质粒或染色体等遗传物质从供体菌转移给受体菌的过程。

接合：是受体菌直接摄取供体菌DNA片段，从而获得新的遗传性状的过程。

转导：以噬菌体为载体将供菌的DNA片段转移到受菌体内使受菌获得供菌的部分遗传性状。 溶原性转换：某些前噬菌体可导致细菌基因型和性状发生改变，例如白喉棒状杆菌产生白喉毒素的机理，温和噬菌体感染细菌时，其基因可整合于宿主菌染色体中，使宿主菌获得噬菌体基因赋予的新的性状，称溶原性转换。原生质体融合：将两种不同的细菌经溶菌酶或青霉素等处理，失去细胞壁成为原生质体后进行融合的过程。融合后的染色体之间发生重组。 病毒的自我复制：以病毒核酸为模板，经过复杂的生化过程，复制子代病毒的核酸并通过转录翻译产生病毒蛋白质，装配成熟后释放到细胞外，这种增殖方式称为病毒的自我复制。 顿挫感染：被病毒侵入的细胞如不能为病毒增殖提供必需成分，则病毒不能合成本身成分，或能合成但不能组装和释出有感染性的病毒颗粒。非容纳细胞与容纳细胞

缺陷病毒：病毒基因组不完整或某一基因位点改变，不能正常增殖，不能复制出完整有感染性的病毒颗粒，此病毒即缺陷病毒。缺陷病毒+辅助病毒完成复制

干扰现象：当两种病毒感染同一宿主细胞时，发生一种病毒的增殖抑制另一种病毒增殖的现象。某些病毒感染细胞时不出现CPE或其他易于测出的变化（如HAd），但能干扰其后感染的另一病毒的增殖，从而阻抑后者所特有的CPE 芽孢：某些细菌在一定环境条件下，胞质脱水浓缩，在菌体内部形成的一个圆形或卵圆形小体。

正常菌群：正常人的体表和与外界相通的眼结膜，口腔、鼻腔、肠道、泌尿生殖道等腔道粘膜中的不同种类和数量及对人体无害而有益的微生物。正常微生物群通称为正常菌群

细菌群体：细菌附着在有生命或无生命的材料表面后，由细菌及其所分泌的胞外多聚物共同组成的呈膜状的细菌群体。 机会性感染：由正常菌群在机体免疫功能低下、寄居部位改变、菌群失调等特定条件下引起的感染。

毒力：致病性的强弱程度。

侵袭素：某些细菌的基因编码一些具有侵袭功能的蛋白多肽，促进该病原菌向邻近组织扩散甚至介导进入邻近黏膜上皮细胞内。

包涵体：细胞浆或细胞核内出现光镜下可见的斑块状结构

G+ 菌:①肽聚糖：聚糖骨架,四肽侧链,五肽交联桥,三维立体②磷壁酸:重要表面抗原，与粘附致病有关，加强稳定细胞壁G－菌:①肽聚糖：聚糖骨架,四肽侧链组成二维结构, ②外膜（脂蛋白、脂质双层、脂多糖组成）功能:屏障结构LPS是G－菌的内毒素。细胞壁结构异同:G+菌/G－菌--强度:较坚韧/较疏松--厚度:厚20-80nm/薄10-15nm--肽聚糖层数:多可达50层/少，1-2层--肽聚糖结构:聚糖骨架,四肽侧链,五肽交联桥,三维立体/聚糖骨架,四肽侧链,二维平面--脂类含量/少/多--磷壁酸:有/无--外膜:无/有,由脂蛋白、脂质双层、脂多糖组成

3：细菌L型，特殊结构种类、化学组成、抗原性及意义？答：定义：细菌细胞壁的肽聚糖结构受理化或生物因素直接破坏或合成被抑制，这种细胞壁受损的细菌在高渗环境下仍可存活，称细菌细胞壁缺陷型或L型。种类：G+菌细胞壁缺失后，仅有胞膜，称原生质体，G--菌肽聚糖层受损，尚有外膜，称原生质球。抗原性及意义：高度多形性，大小不一；大多染成G－；高渗低琼脂含血清培养基—油煎蛋样菌落；去除诱因后，有些可回复为原菌；某些L型仍有致病性,引起慢性感染。作用于胞壁的抗菌性药对L型感染治疗无效

4：细菌的特殊结构？答：①荚膜：多糖或多肽的多聚体。功能a抗吞噬b黏附作用c抗有害物质的损伤d有抗原性，用于细菌的鉴定和分型②鞭毛：蛋白质，由基础小体丝状体钩状体组成，高度抗原性。功能a是细菌的运动器官b某些细菌的鞭毛与致病性有关c根据鞭毛的动力和鞭毛的抗原性可用以细菌的鉴别和分类③菌毛：由亚单位菌毛蛋白构成。功能a黏附作用b传递遗传物质④芽孢：生产芽孢的细菌都是革阳菌。功能：a增强抵抗力b不直接致病c鉴定。

5：细菌的遗传物质？答：细菌染色体，质粒，噬菌体：

6：基因转移与重组方式的种类及定义？答：定义：基因转移：遗传物质由供体菌转入受体菌的过程为基因转移。重组：转移的基因与受体菌DNA整合在一起称为重组，重组使受体菌获得供体菌的某些性状。分类：转化,接合,转导,融合,转换.【表格】类型：基因来源/转移方式--转化：供菌游离的DNA片段/直接摄入--接合：供菌质粒DNA/ 性菌毛--转导：供菌任意DNA或噬菌体与供菌特定DNA/噬菌体--融合：两菌原生质体的DNA/融合--转换：温和噬菌体/吸附穿入

7：噬菌体及其相关概念。答：1）毒性噬菌体：在宿主菌细胞内噬菌体增殖产生子代噬菌体，宿主菌被裂解，形成溶菌性周期。2）温和噬菌体：噬菌体基因与宿主菌染色体整合，成为前噬菌体，噬菌体DNA能随细菌DNA复制而复制，并随细菌的分裂而传到子代细菌的基因组中，变成溶原性细菌，形成溶原性周期。

8：细菌生长繁殖的条件？答:营养物质/酸碱度 多数病原菌最适pH为7.2~7.6/温度 多数病原菌生长最适温度为37℃/气体 据代谢时对分子氧的需要与否，专性需氧菌、微需氧菌、兼性厌氧菌、专性厌氧菌/渗透压。

9：细菌群体的生长繁殖？答：生长曲线：一定数量的细菌接种到定量的液体培养基中，连续定时取样测定活菌数量，以培养时间为横坐标，以活菌数的对数为纵坐标作图，得到的一条曲线。迟缓期：适应阶段。对数期：对抗生素敏感，细菌鉴定选此期。稳定期：代谢产物形成（如外毒素、抗生素、芽胞等）。衰亡期：菌体细胞呈现多种形态。

10：按细菌对氧需要的分类？答：据代谢时对分子氧的需要与否，专性需氧菌、微需氧菌、

14：双链DNA病毒的复制周期？答：vDNA（RNA聚合酶）→早期mRNA（翻译）→早期蛋白（酶）→ vDNA（酶）子代DNA → mRNA→结构蛋白.→子代DNA+结构蛋白→子代病毒。简要过程：吸附，穿入，脱壳，生物合成，组装、成熟与释放。

15：顿挫病毒，缺陷病毒的概念？答：顿挫病毒：被病毒侵入的细胞如不能为病毒增殖提供必需成分，则病毒不能合成本身成分，或能合成但不能组装和释出有感染性的病毒颗粒。非容纳细胞与容纳细胞。缺陷病毒：病毒基因组不完整或某一基因位点改变，不能正常增殖，不能复制出完整有感染性的病毒颗粒，此病毒即缺陷病毒。缺陷病毒+辅助病毒=完成复制 16：细菌的感染与致病。答：感染：在一定条件下，微生物与机体相互作用并导致机体产生不同程度的病理过程。★

17：细菌的毒力比较，外毒素与内毒素生物学特性。答：【表格】种类：内毒素★外毒素。来源：G-菌★G+菌部分G-菌。编码基因：染色体基因★质粒或前噬菌体或染色体基因。存在部位：细胞壁成分、细菌裂解后释出★活菌分泌或细菌溶解后散出。化学成分：脂多糖★蛋白质。稳定性：好(160℃2~4h才破坏）★差（60~80 ℃30m可破坏）。毒性作用：弱、各种内毒素作用大致相同★强、对机体组织器官有选择性。抗原性：弱，甲醛处理后不能形成类毒素★强，能刺激机体形成抗毒素，经甲醛脱毒后能形成类毒素。

18：细菌感染的类型答：①不感染②隐性感染③潜伏感染④显性感染：急慢性感染；局部、全身感染⑤带菌状态。

19：病毒感染类型。答：①隐性感染②显性感染：急性病毒感染：潜伏期短，发病急，数日或数周回复，病原消灭型感染。持续性病毒感染：慢性病毒感染；潜伏性病毒感染；慢发病毒感染。

20：细菌的致病机制。答：细菌的致病性强弱取决于毒力，细菌的毒力因子：①侵袭力：致病菌突破宿主生理屏障，进入机体并在体内定植、繁殖和扩散的能力包括黏附素、荚膜和微荚膜、侵袭性物质②毒素：细菌产生的损伤宿主引起生理功能紊乱的毒性物质，包括内毒素和外毒素。

21：正常菌群的生理作用。答：①生物拮抗：竞争粘附（占位性保护）作用；产生有害代谢物质；营养竞争②营养作用③免疫作用④抑癌作用⑤抗衰老作用。

22：病毒分离鉴定方法及病毒在培养细胞中的增殖的指标。答：病毒的分离：①动物接种②鸡胚培养；流感病毒初次分离接种于羊膜腔；流感病毒的再培养接种于尿囊腔③组织培养④细胞培养 — 病毒分离鉴定中最常用的方法单层细胞培养；原代细胞培养；二倍体细胞培养；传代细胞培养。指标：1）细胞的变化①细胞病变效应：有些病毒在细胞内增殖时引起的特有的细胞病变，如细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落②多核巨细胞形成：有些病毒如麻疹病毒、巨细胞病毒等作用于细胞膜，使邻近的细胞融合，形成多核巨细胞③胞质或核内包涵体的形成狂犬病病毒、巨细胞病毒。2）红细胞吸附流感病毒等感染细胞后，由于细胞膜上出现了血凝素，具有吸附脊椎动物红细胞的能力，这一现象称为红细胞吸附。常用来鉴定具有血凝素的黏病毒或副黏病毒的增殖3）.红细胞凝集检测含血凝素病毒的方法4）干扰现象5）空斑形成试验。

23：病毒成份的检测（抗原、核酸检测）答：1.病毒抗原的检测2.病毒核酸的检测

24：真菌的形态结构（单细胞和多细胞真菌）。

灰黄霉素、制霉菌素B、二性霉素B、氟康唑和酮康唑；对抗生素不敏感。

28：抗菌药物的种类与作用机制。答：杀菌药和抑菌药。机制：①抑制细菌细胞壁的合成②抑制细菌

细胞膜功③抑制细菌蛋白质合成④抑制细菌核酸合成。29：细菌耐药的机制。答：产生钝化酶；细胞通透性的改变；靶位结构的改变；建立代谢旁路；代谢酶分子的改变

30：医院感染的定义。答：由医院的病原生物或其毒素导致的局部或全身感染性疾病。

31：细菌分离培养和鉴定、生化试验、血清学试验？答：细菌分离培养和鉴定：原则上应对所有送检标本做分离培养，以便获得单个菌落后进行纯培养，从而对细菌做进一步的生物学、免疫学、致病性或细菌的药物敏感性等方面的检查，最终获得确切的报告。生化试验：得到细菌的纯培养物后，用糖发酵试验，吲哚试验，硝酸盐还原实验等对细菌的酶系统和其代谢产物的检查，是鉴别细菌的重要方法之一。血清学实验：利用含已知的特异性抗体的免疫血清，对细菌进行群和型的鉴别。

微生物种类名称★生物学性状★致病物质、致病机理及所致疾病

破伤风梭菌：菌体细长，芽胞正圆比菌体粗，位于菌体顶端菌体鼓槌状★不发酵糖类，不分解蛋白质。条件：局部伤口需形成厌氧微环境，伤口窄而深，有泥土或异物污染，大面积创伤，坏死组织多，局部组织缺血，同时有需氧菌或兼性厌氧菌混合感染的伤口。防治原则：特异性预防：注射破伤风类毒素主动免疫；迅速对伤口清创扩创，防止形成厌氧微环境；紧急预防：TAT（精制破伤风抗毒素）；治疗： 早期足量使用TAT，抗生素。 产气荚膜梭菌：G+粗大杆菌，芽胞位于次极端，椭圆形，直径小于菌体形成明显荚膜★血平板：双层溶血环，代谢十分活跃，牛奶培养基：“汹涌发酵”现象。增加血管通透性，组织坏死，气性坏疽，食物中毒，坏死性肠炎。

肉毒梭菌：G+粗短杆菌，芽胞位于次极端，椭圆形，菌体呈网球拍状，严格厌氧，分型多，生化反应复杂★肉毒毒素，抑制乙酰胆碱释放，引起运动神经末梢失调→肌肉麻痹；食物中毒，婴儿肉毒中毒。

支原体：菌落油煎蛋型，高度多形态型，细胞膜含高度固醇，无细胞壁，对青霉素有抵抗作用★支原体肺炎，病变为间质性肺炎，可合并支气管肺炎。称为原发性非典型性肺炎。不规则发热，刺激性咳嗽，头痛。婴幼儿病情严重，发病急，病程长，以呼吸困难为主。有些合并其他系统病变，如循环系统等。飞沫传播。 立克次体：是一类体积微小，绝大多数为自身代谢不完善，严格细胞内寄生的原核细胞型微生物★流行性斑疹伤寒、地方性斑疹伤寒、恙虫病、Q热

衣原体：严格细胞内寄生，有独特发育周期，能通过细菌滤器，原核细胞型微生物★ 沙眼:感染眼结膜上皮细胞→增殖，包涵体→局部炎症→早期流泪、有粘液脓性分泌物、结膜充血及滤泡增生→后期结膜瘢痕、眼睑内翻、倒睫以及角膜血管翳引起的角膜损害→影响视力或致盲包涵体结膜炎、泌尿生殖道感染、沙眼衣原体肺炎、性病淋巴肉芽肿

螺旋体：是一类细长、柔软、弯曲、运动活泼的原核细胞型微生物基本结构及生物学形状与细菌相似★梅毒，人是唯一传染源，致病物质为荚膜样物质，透明质酸酶；后天通过性接触传播或者先天经过母体传播。

第19篇：微生物实验菌种保藏方案

一、石蜡油低温保藏法

本方法的原理是在长好的斜面菌上覆盖灭菌的液体石蜡，达到菌体与空气隔绝，使菌处于生长和代谢停止状态，同时石蜡油还防止水分蒸发，在低温下达到较长期的保藏菌种的目的。保藏温度要求在-4～4℃下。液体石蜡法适用于不产孢子的菌种。具体操作是：菌种为斜面培养菌种，斜面不宜过长；选择纯净优质石蜡油，置三角烧瓶中经过121℃高压蒸汽灭菌1～2h，将其放烘箱中(160℃左右)干热处理，去除灭菌时渗入的水分，待石蜡油变得清澈透明后冷却即可加入斜面，斜面上不能出现气泡，液蜡添加量以高出斜面顶部约1cm为宜。

二、甘油管冷冻保藏法

1．试验方法介绍本法也是利用微生物在甘油中生长和代谢受到抑制的原理达到保藏目的。其方法是，将80%的甘油高压蒸汽灭菌待用。将培养好的斜面菌种用无菌水制成高浓度的菌悬液(108～1010/ml)。取1ml灭菌甘油放入与甘油充分混匀，使甘油浓度约为10%-30%，于-70℃下冻存。-20℃保存时间较短。或采用体积比为8：2的甘油－生理盐水，加入新鲜培养的菌体肉汤，混合均匀后至-20℃冰箱保存。

2．效果该法适用于一般细菌的保存，同时也适用于链球菌、弧菌、真菌等需特殊方法保存的菌种，适用范围广，操作简便，效果好，无变异现象发生。甘油－生理盐水保存液保存菌种优于甘油原液，其原因可能是加入生理盐水适当降低了甘油的高渗作用，且有肉汤培养物适量增加保存液的营养成分，从而更好地保护了待保存的菌株。

三、真空冷冻干燥法

1．试验原理

真空冷冻干燥保藏法是兼具低温、干燥、除氧三方面菌种保藏的主要因素，除不宜于丝状真菌的菌丝体外，对病毒、细菌、放线菌、酵母及丝状菌孢子等各类微生物都适用，不宜用冻干法保存的微生物不到2%。冷冻干燥法是在低温下快速将细胞冻结，然后在真空条件下干燥，使微生物的生长和酶活动停止。为了防止在冷冻和水分升华过程中对细胞的损害，要采用保护剂来制备细胞悬液，使菌在冻结和脱水过程中起到保护作用的溶质，通过氢键和离子键对水和细胞所产生的亲和力来稳定细胞成分的构型。即是使样品中的水分在冰冻状态下，抽真空减压，使冻结的冰直接升华为水蒸气，使样品达到干燥。干燥后的微生物在真空下封装，与空气隔绝，达到长期保藏的目的。

2．试验步骤

1）安瓿管准备选取规格约直径为8mm，高100mm的中性玻璃安瓿管，先用2%盐酸浸泡8～10h，再经自来水冲洗多次，用蒸馏水涮洗2～3次，烘干；在每管内放入打好菌号及日期的标签，字面朝向管壁，管口塞好棉塞，灭菌备用。

2）保护剂的选择及制备冷冻干燥保藏法使用的保护剂种类很多，效果不尽相同，通常采用高分子化合物与低分子化合物混合使用效果更好。在配制时注意比例、浓度、pH和灭菌方法。一些对热敏感的保护剂如血清等用过滤除菌，牛奶、葡萄糖及乳糖等要控制灭菌温度。一般情况下，多数菌种可以用脱脂乳糖等要控制灭菌温度。一般情况下，多数菌种可以用脱乳为保护剂。

3）菌种准备及分装菌种要求为生长良好的纯种，菌龄以处于稳定期为好，孢子是新鲜的。每支长好的斜面加2～3ml保护剂，用接种环将菌苔轻轻刮起(注意勿刮起培养基)，制成菌悬液。如用液体培养的菌种，则需经离心收集和用灭菌生理盐水洗涤细胞，收集的菌体用保护剂悬浮制成菌悬液。悬液中菌数要求达到108～1010cfu/ml为宜。悬液制备完成尽快分装和冻结。分装安瓿时可用灭菌的长滴入安瓿管底部，装量可依据冷冻干燥机效能而定。

4）预冻分装好的安瓿管需要进行预冻，即放在-30～-40℃下冻结20～60min，也可以用干冰和无水乙醇冻5～10min。

5）冷冻干燥经预冻的安瓿放入干燥箱中开始抽真空干燥。此时干燥箱温度控制在-30℃以下，并尽快使真度达到66Pa以下。此后可还渐升温以加速水分升华，但升温不宜过快，以

免引起样品融化。干燥时间视冻干机效率、样品装量及性质等而定，以样品最终水分含量达到1%～3%为准。具体操作时是根据冻干样品呈酥块工松散片状；真空度接近空载时最高真空；样品温度与管外温度接近。

干燥完毕将安瓿管在真空下用火焰烧熔密封，并用高频真空检测真空度。

6）保藏及冻干管的启用密封好的冻干管在4℃或-18℃下保藏。当需用冻干菌种时，取出安瓿管用酒精表面消毒，用小砂轮在无菌条件下打开，或将安瓿顶部在酒精灯火焰上灼烧，迅速滴上冷的无菌水，使管破裂，然后用镊子等轻轻敲碎管口，加入0.3～0.5ml液体培养基溶解冻干菌块成为悬液，用无菌滴管或接种环移至斜面或液体培养基进行培养。

7）影响菌株生长因素

①菌的质量：保藏的菌种应培养在营养丰富的最适条件下，使之进入稳定期，稍老一些的菌体对环境抵抗力强。另处，作为冷冻干燥的菌悬液细胞浓度要高不同的菌对冷冻干燥的耐受程度不同，如果保存的菌液细胞浓度不高，就会使以后传种造成困难，保存期也会受到影响。

②保护剂：不同种类的保护剂对不同微生物的作用是不同的，如个别菌种在脱脂乳作保护剂的情况下死亡率高达99.99%，而采用葡聚糖等混和保护剂时死亡率大大减少。一般情况下，那些容易保存的菌种对保护剂的要求不很严格，而不易保存的菌种对保护剂的要求却很苛刻。因此，选择好的保护剂是冷冻干燥保存菌种的关键因素。

③干燥速度：实验表明，慢速干燥比快速干燥存活率高，如青霉菌6h干燥存活率为67.3%，而3h为59%。

④空气的影响：冷冻干燥后空气对细菌细胞影响较大，可导致细胞损伤进而死亡，故在冻干后应立即在真空下融封，才有利于长期保存。

⑤温度的影响在干燥和真空状况下温度的影响远没有上述几项因素重要，因此可以在室温下保存，但许多微生物在4℃保存的存活率要比在室温下高1倍。⑥含水量的影响：水分含量过高对菌存活不利，完全脱水也不利于保存，一般把干燥后的细胞含水量控制在3%以下(1%～3%)。 ⑦复苏培养：打开安瓿管后加入无菌水使 冻干菌融化，融化速度慢比快速融化的成活率要高。

菌种能否适宜于冻干保存，需经过实验来证明，一般是在保存1个月进行复苏培养，如果菌的成活率高于10%，即认为可用冻干保存法保存，以后6个月、2年、5年、10年再进行检查存活情况，以确定保存期的上限。

冻干保藏的效果因微生物种类而异，一般是细菌＞放线菌＞真菌＞藻类，而菌丝体不宜用此法保存。

3．试验效果冷冻干燥保存的菌种存活时间长、效果好，一般菌种可保存5年以上，有的可保藏15年以上不发生变异。还具有体积小、不易污染、便于运输等优点，是一种用得最为广泛的菌种保藏方法。

4．试验仪器及试剂冷冻干燥备有不同型号和类型，但都由四个部分组成：干燥箱、蒸汽捕集器、真空泵、冷冻系统。干燥箱可控制温度范围为-40～40℃。

四、液氮超低温保存

1．试验原理本方法是近年推广使用的一种菌种保存法。大多数微生物如病毒、噬菌体，立克氏体，各种细菌、放细菌、支原体，各种丝状菌、酵母、藻类和原虫，特别是一些无法用冻干保存的微生物，都可用此法长期保存。工业微生物高产菌种也逐步采用此法保存。液氮保存的原理是微生物在-130℃以下温度时，它的新陈代谢作用停止，化学反应也消失，而液氮温度可达-196℃，在这种情况下可以长期保存。

2．试验步骤

1) 安瓿管准备一般要求用95%料或GG17的玻管制作，以能承受巨大的温差变化而不破损，大小根据需要而定。用印同在管壁上书写菌号，160℃烘干，加棉塞灭菌备用。

2) 菌种准备在最适培养基斜面上培养得到健壮菌种，制成悬浮液，如为不产孢子的

真菌，则采用斜面或液体振荡培养，制成菌丝片段。将菌悬淮分装至灭菌安瓿管中，每管0.2～0.5ml，然后用火焰将安瓿熔封。

3) 冻结将熔封后的安瓿管入大慢速冻结器上，以每分钟下降1℃的速度冷冻，当安瓿管温度下降至-35℃时，即可把安瓿管移入液氮内作长期保藏。

4) 菌种的复苏培养直至全部溶化为止，当溶化后即开启安瓿移至培养基内培养，扣作时应特别注意安全，防止爆炸或冻伤，不宜戴线手套，要戴皮手套操作

3．试验仪器及试剂

1）保护剂与冷冻干燥保存一样，液氮保存菌种也需要有保护物质，可以用10%的甘油，使用方便、效果好，但有些菌对甘油敏感，效果不佳，可选用其他保护剂，常用的有5%～10%(V/V)二甲基亚砜；20%二甲亚砜加1%蛋白陈；吐温80及0.4mmol聚乙烯氮戊环等，糖类也可作为一种保护剂，但浓度适当加以控制。

2）液氮罐

第20篇：“无处不在的微生物“实验感想

“无处不在的微生物”实验感想

韩俊

1453110 在此次实验课上，通过老师生动细致的理论讲解以及自己的动手实验，我收获颇多，主要有以下几点：

1.微生物主要分为细菌，真菌，病毒三类，个体微小，构造简单，多为单细胞，简单多细胞，以及非细胞结构。

2.细菌的形态主要有杆菌，球菌，螺旋菌三类，在致病细菌中，以结核杆菌，金黄色葡萄球菌，破伤风杆菌较为常见。结核杆菌可生长在身体各部，但由于其是好氧型细菌，在肺内繁殖的机会更大；金黄色葡萄球菌分布广泛，可引起化脓感染，如扁桃体炎；破伤风杆菌为厌氧型细菌，当人体受伤部位较深时，可在伤口内繁殖。旧时由于医疗条件差，新生儿出生时仅用火烧过的剪刀剪脐带，而破伤风杆菌生命顽强，所以有新生儿因此感染破伤风而死亡；

3.微生物分布极为广泛，数量也相当庞大，但其中大部分对人体无利也无害。对人体有害的细菌主要是上述致病菌以及对生活造成影响的细菌如霉菌等，对人类有利的细菌有酵母菌，乳酸菌等，被广泛用于食品加工及相关行业。而如大肠杆菌，在人体大肠中有分布，还可用于胰岛素的载体，但若在错了地方，它也可变成一种致病菌。

4.实验一：观察大肠杆菌形态

取样——烘干——固定——染色——干燥 观察到淡紫色颗粒状细菌

5.实验二：观察牙垢中的螺旋菌

取样——铺片——干燥——观察 （结果并未观察到……）

通过这次实验课，我了解了微生物的形态，分布，及基本的观察方法，看到了显微镜下的奇妙的微生物们，同时，通过操纵显微镜，提高了自己的动手能力，收获很大。

《微生物实验总结范文.doc》

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