毒理学及微生物实验

2020-03-03 21:46:20 来源：范文大全收藏下载本文

实验

一、毒理学实验方法

[实验目的]通过实验，掌握实验动物的一般操作技术。

[实验材料]

实验动物：昆明种小鼠

实验器材：灌胃器、手术剪等。

[操作方法]

1.实验动物物种的选择

选择的基本原则是：选择对受试物在代谢、生物化学等与人最接近；自然寿命不太长；易于饲养和操作；经济易获得。

2.实验动物的被毛去除方法

(1)拔毛法将动物固定后，将所需部位的被毛拔去即可。

(2)剪毛法将动物固定后，用手术剪紧贴动物皮肤将所需部位的被毛剪去。

3.实验动物的处死方法

颈椎脱臼法：一只手用力住下按住鼠头，另一只手抓住鼠尾，用颈稍向后上方一拉，使之颈椎脱曰动物立即死亡。

空气拴塞法；急性大失血法和吸入法致死。

实验二动物染毒方法

[实验目的]通过实验，掌握实验动物的一般染毒方法。

[实验材料]

实验动物：昆明种小鼠

实验器材：灌胃器、注射器、手术剪等。

三、实验方法

1 灌胃：将受试物配制成溶液或混悬液，以注射器经导管注入胃内。经口多次染毒，一般不禁食，但应每日定时染毒。

2 口服法染毒：将受试物掺入动物饲料或饮水中供实验动物自行摄入。实验动物以食物消耗量计算其实际染毒剂量。

3 经呼吸道染毒

I 静式吸入染毒：将一定数量的啮齿类动物放在密闭的染毒柜中，加入易挥发的液态受试物或气态受试物使成一定浓度。受试物浓度，以mg/m3表示。

II 动式吸入染毒：由染毒柜、机械通风系统和配气系统三部分构成

动式吸入染毒柜中受试物的浓度应实际监测。

4 经皮肤染毒经皮肤染毒的目的有两种。一种是经皮染毒毒性试验，如经皮LD50测定常用大鼠。另一种是皮肤刺激和致敏试验。

试验前用机械法或化学法脱毛。于脱毛后24小时涂抹一定量受试物，盖上一层塑料薄膜，接触规定的时间。

4.注射染毒

注射用药品，应以注射途径染毒，对大小鼠可用静脉注射，对非啮齿类可模拟临床用药途径，如狗可用后肢隐静脉注射，而啮齿类的尾静脉和肌肉注射难以多次染毒，必要时可改为皮下注射。

注射染毒，应调整受试物的pH及渗透压，pH应5～8，最好是等渗溶液，动物对高渗的耐受力比低渗强。静脉注射应控制速度，大鼠尾静脉注射最好控制在10秒以上。腹腔注射在遗传毒理学实验中有时也用，但在致畸试验、肝UDS研究不应该用腹腔注射，以避免可能的损伤和局部高浓度对靶器官的影响。

实验

三、半数致死量测定

[实验目的]掌握灌胃染毒的方法；学习掌握测定外源化合物半数致死量（LD50）测定方法。

[实验材料]

实验动物：昆明种小鼠（雌雄各半）

实验药品：苦味酸酒精饱和液，亚硝酸钠

实验器材：灌胃器，电子称等

[实验方法]

1预试验

取小鼠8～10只，以2只为一组分成4～5组，选择组距较大的一系列剂量，分别按组灌胃染毒亚硝酸钠溶液，找出引起0%死亡率和100％死亡率剂量的所在范围。

2正式试验

在预初验所获得的0%和100%致死量的范围内，选用几个剂量，每组10只小鼠完成动物分组和剂量计算后灌胃染毒。

3LD50测定中应观察纪录的项目

⑴实验要素：实验题目，实验日期，药物的批号等。

⑵给药后各种反应：死前的现象，各组死亡的只数等。

4 实验结果计算

实验完毕后，清点各组死亡鼠数和算出死亡率（P），按改良寇氏法公式进行计算：

LD50= ㏒ -1[Xm –i (∑P – 0.5)]

其中：

Xm：最大剂量的对数值

i ：相邻两组剂量对数值之差

P：各组动物死亡率

∑P：各组动物死亡率之总和

亚硝酸剂量：464（全死）、

215、100、46.4（死亡20%）mg/kg

参考剂量LD50：175mg/kg

蓄积毒性试验

蓄积毒性试验是评价外来化合物蓄积毒性的实验方法。常用的方法有：①蓄积系数实验法。②20天蓄积试验法，成年大鼠随机分为5组，每组10只，雌雄各半。各组剂量分别为LD50的1/20、1/

10、1/

5、1/2，另设溶剂对照组。每天灌胃一次，连续20天。然后观察7天。如1/20 LD50组已出现死亡，且各剂量组动物死亡呈剂量-反应关系，则受试动物有强蓄积毒性。如1/20 LD50组无死亡，但各剂量组死亡呈剂量-反应关系，表明有中等蓄积毒性。如1/20 LD50组无死亡，各剂量组死亡也剂量-反应关系，可认为无明显蓄积毒性。

致死剂量

1、半数致死量(median lethal dose，LD50) 较为简单的定义是指引起一群受试对象50%个体死亡所需的剂量。精确的定义指统计学上获得的，预计引起动物半数死亡的单一剂量。LD50的单位为mg/kg体重，LD50的数值越小，表示毒物的毒性越强；反之，LD50数值越大，毒物的毒性越低。与LD50概念相同的剂量单位还有半数致死浓度（LC50)和半数抑制浓度或半数失能浓度（IC50)。LC50 是指能引起一群受试对象50%个体死亡所需的浓度。IC50是指一种毒物能将某种酶活力抑制50%所需的浓度。毒理学最早用于评价急性毒性的指标就是死亡，因为死亡是各种化学物共同的、最严重的效应，它易于观察，不需特殊的检测设备。长期以来，急性致死毒性是

比较、衡量毒性大小的公认方法。在毒理学试验中，所需的实验动物数量是根据LD50不同的测定方法决定的。因为LD50并不是实验测得的某一剂量，而是根据不同剂量组而求得的数据。LD50在毒理中是最常用于表示化学物毒性分级的指标。因为剂量—反应关系的“S”型曲线在中段趋于直线，直线中点为50%，故LD50值最具有代表性。LD50值可受许多因素的影响，如动物种属和品系、性别、接触途径等，因此，表示LD50时，应注明动物种系和接触途径。雌雄动物应分别计算，并应有95%可信限。如受试物在液体中时，以半数致死浓度（median lethal

concentration，LC50）表示，单位为mg/L。LC50也用于表示空气中化学物的浓度，以mg/m3为表示单位。

2、绝对致死剂量（absolute lethal dose，LD100）：指某实验总体中引起一组受试动物全部死亡的最低剂量。实验总体中一组受试动物的数量视不同实验设计而定，少则10个，多则50～100个以上。

3、最小致死剂量（minimal lethal dose，MLD或MLC或LD01）：指某实验总体的一组受试动物中仅引起个别动物死亡的剂量，其低一档的剂量即不再引起动物死亡。

4、最大耐受剂量（maximal tolerance dose，MTD或LD0或LC0）：指某实验总体的一组受试动物中不引起动物死亡的最大剂量

微生物检验

实验一

目的：

1、掌握微生物检验工作中常用仪器设备的工作原理、使用方法、常见故障的排除和一般的维修技术。

2、了解微生物检验中精密仪器的使用方法及原理。

实验二

目的：

掌握用于微生物学检验的各种玻璃器皿(新购进的与培养过微生物的)的清洗要求和方法及试剂的配制方法。