动检所实习报告
2020-03-04 01:12:47 来源：范文大全收藏下载本文
广东省动物防疫监督总所实习报告
为期两个月的实习结束了，写写实习两个月的感想吧。两个月很短，刚学会大部分的实验方法就要走了，两个月很长，这两个月比大学一年学到的东西还要多。在思想上开阔了我们的思维方式，在学业上学到相当多的专业知识，收获良多的实习结束不代表停止，而是我们人生旅程的开始，第一次初涉社会的经历为我下一阶段的社会体验做了一定程度上的铺垫。
在这两个月中我的岗位是新城疫、H
5、H
9、疯牛病、口蹄疫等病毒的血清、拭子、犬脑等样品检测。首先说说禽类血清的检测，检测的内容包括：禽白血病病毒ELISA检测、狂犬病Ab-ELISA检测、禽网状内皮组织增殖症病毒抗体检测、鸡贫血病病毒抗体检测、禽白血病病毒J亚群抗体检测、血清凝集实验、血清抑制实验等等。这些实验方法大部分是ELISA，所以过程大同小异，因为在课堂上学到过相关知识，所以在这次的实习操作时比较容易上手，跟着所里的老师学习操作原理和操作流程，很快就学会了此类方法，需要特别注意的是洗版要洗得彻底。另一类实验就是血清抑制实验，通过观察血细胞的凝集程度和流样程度来判断样品中的病毒含量。原理是病毒表面物质可以抑制血细胞凝集，加入抗原后与细胞表面的物质结合导致血细胞不能凝集，产生流泪状，因为依次按
2、
2、
2、24比例计算，所以就可根据流泪状到哪一个孔计算出病毒含量。不过之前要先确定滴度，然后再根据滴度来配置抗原溶液浓度。实验过程是：
1、在微量反应板上全部加入25ulPBS水。
2、加入25ul样品血清，依次稀释到第10孔弃去25ul。
3、加入按比例配好的抗原溶液25ul，加到11孔。在室温条件下反应30min。
4、全部加入25ul血清，同样在室温下反应30min，过后即可观察结果。操作过程严格要求操作技巧，枪头的使用以及加样技巧都有很高的要求，样品与样品之间不可以交叉污染，枪头不可以碰到管壁，为此我们还专门训练了加样手法。经过两个月的训练我们的方法有所进步，加样速度有所提升，老师也予于我们相当高的评价。
接下来就是样品为拭子的检测，相同的病毒用不同的方法检测。样品是动物唾液拭子或分泌物的拭子，用的是病毒核酸提取的方法，用相应的试剂盒提取相应病毒的DNA或者RNA，然后用荧光PCR仪来检测病毒含量。荧光PCR仪的原理是：在PCR扩增时，加入一对引物的同时再加入一个特异性的荧光探针。该2 3
探针为一直线型的寡核苷酸，两端分别标记一个荧光报告基团和一个荧光淬灭基团，探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收，PCR 仪检测不到荧光信号； PCR扩增时（在延伸阶段），Taq 酶的 5\' － 3\' 切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条 DNA 链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与 PCR 产物形成完全同步，随着复制数量的提高所以荧光信号越来越强，PCR仪就检测相应的荧光信号强度定量检测病毒含量。实验方法是：
1、加样、混样。
2、抽提。
3、配液。
4、荧光PCR。其中抽提是用仪器提取，只需配好七个板，第一板是130ul裂解液加样品50ul、20ul磁珠。第
二、三板是洗液1150ul第
四、五板加洗液2 150ul。 第六板加buffer30-40ul。 第七板空。放到仪器里面全自动抽提。
上面所说的都是机提的方法步骤，现在说说手提RNA的方法以及RT-PCR，回收目的片段的方法步骤。
一、提取RNA：裂解液600ul+200ul样品溶液到离心管，反复吸取以
免病毒残留在枪头上造成污染。加入200ul冷冻氯仿剧烈摇动，
在4°C12000r离心15min，抽取400ul样品加等量异丙醇，摇荡。
继续在4°C12000r离心15min，倒去上清，加入600ul乙醇摇匀，
在4°C12000r离心1min，去掉多余的乙醇，加入20ulDEPC水
保存。
二、反转录：按照规定的反应体系配液，加模板（提取的样品），进
行反转录，产物为CDNA.（易于保存）
三、PCR：按照规定的反应体系加入CDNA产物，进行目的片段的
扩增。
四、
五、电泳：观察目的片段情况，若有清晰条带直接切取凝胶进行回收。 回收：把凝胶放入Eppendof管中，用binding solution液进行溶
胶，使DNA结合到膜上，再用Wash solution洗液洗三次（离心
三次），加入DEPC水溶解DNA，加入连接体系（1ul载体
PUC18+4ulDNA+5ulsolution1）16°连接24h。
以上所说的是核酸的提取以及片段回收技术，连接好了以后就是目的基因片段
了。掌握好这个技术不仅让自己的学有所成，而且这项技术在未来也可能成为事业上的发光点，生物技术这个专业主要就是学技术，在掌握好这个技术的同时更要掌握好相关的实验原理，操作准确，数据精确真实，以诚实勤劳、孜孜不倦的科学人精神鞭笞自己，努力学技术，认真学做人。
在为时两个月的实习期，我们还有幸出去出差了一次，去了白云区的鸡场抽取血清和拭子，就是所谓的抽检。10月28号，我们跟着师兄来到了白云区的一家大型养鸡场，里面大部分是鸡，还有少部分的鸭和鹅，分区明确，听说这还是亚洲分配得最好的养鸡场，每一家个体户都把自己的鸡鸭鹅管理得井井有条，按照上级的安排抽取了其中十家个体户的鸡，一家鸭，一家鹅。师兄和一个老师以很快的速度抽取血清和撩拭子，我们就要很快的把血清和拭子分装在不同的离心管内，做好标记。在抽取过程中发现鹅是最难抽血清的，稍微不熟悉脉络的人都抽取不好，抽取脚部的静脉最为快速，要做到快准好真的需要多年的经验，哪一件事不是经过苦练而达到纯熟呢？
认识的不同阶级、不同层次的人多了，就要学会如何去相处，处理好人与人之间的关系，面对领导、面对上级理应有的谦虚谨慎别相忘，在一个新环境你就是一个新人，任何人都要去尊重，包括看门的保安叔叔，只有你去尊重了别人，别人才会一样的尊重你，社会不如学校的同学老师，学校里犯了错误没有人会怪你只要你认真去改，但在社会你认真去改了别人也未必原谅你，所以社会的人际关系网就像一条条钢丝线，走在上面要小心翼翼，一着不慎，满盘皆输。认真做事，认真做人，踏踏实实，对人真诚，这将成为我社会生活的做人基本原则。
感谢广东省动物防疫监督总所给我们这个机会在这里学习，在省总所实习的两个月学习到的东西远远不止这些，心里的成长无法表述，知识的增长无法衡量，开阔的视野无法计算，思维的开展无法度量，学有所成，受用终生。
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