自考现代生物制药技术
2020-03-03 04:11:08 来源：范文大全收藏下载本文
自考现代生物制药技术
一、名词概念
二、知识点
自考现代生物制药技术
吉林大学现代生物制药技术)
一、名词概念 1.生物工程：应用生物科学17微细胞：是某些细菌的突变株在生长期间产生的一类微小的圆形的无核细胞，它具细胞壁及细胞膜、DNA上，并引入受体细胞，从而可使受体细胞获得外源基因的遗传信息，并进行正常的复制，表达和遗传。 细胞大规模培养。
52半连续培养法：在反应器中投料和接种，培养一段时间后，将培养液和新鲜培的理论、方法，按照人们设计的蓝图，改良加工生物或用生物及其制备物作为加工原料，以提供所需生物制品为人类社会服力的综合性科学技术。
2.
养液进行交换的掊养方法，称为半连续培养法。
53动物细胞工程：根据细胞生物学及工程学原理定向改造动物细胞遗传性、创造新物种，通过工程化为人类提供名贵药品服务的技术，称为动物细胞工程。 54动物细胞培养技术：在一定条件下，通过人工供给营养物质及生长因子，使离体动物细胞或组织生长繁殖的方法，称为动物细胞培养技术。
55细胞块培养法：将动物组织切成直径1～2mm小块，进行培养的方法，称为组织块培养法。
56细胞单层培养法：动物组织块经销化分散成单个细胞或细胞团块后，粘附于培养容器表面培养成新生细胞单层的培养法，称为细胞单层培养法。
57单细胞分离培养：动物组织分散后，将其单个细胞培养成纯系细胞集群的技术，称之为单胞分离培养。 58确立细胞株：正常细胞在移植继代过程中，有些细胞增殖力突增强，在特定条件下可无限繁殖，与初代细胞相比，其形态、生理生化特性，病毒敏感生，抗原性及染色体结构均发生变化，具有致癌性，这些细胞称为确立细胞株。
59动物体细胞杂交技术：在外力作用下，令两上或两上以上异源细胞合并为一个多核细胞的过程，称为动物体细胞杂交技术。
60核体：细胞核连同其外表薄层细胞质构成的颗粒称为核体。
61胞质体：不具有细胞核的细胞称为胞质体。
62微核杂种细胞：按完整细胞之间的融合方式，将微核与另一完整细胞融合，使后者获得另一种细胞中的若干个染色体，所获融合子称为微核杂种细胞。
63抗药性筛选系统：利用生物细胞对药物敏感性差异筛选杂种细胞的方法。 64营养缺陷型细胞：在一些营养物质的合成能力上出现缺陷，因此必须在基本培养基中加入相应的有机成分才能正常生长的变异细胞。
65营养互补选择法：利用两种亲本细胞营养互补作用原理筛选杂种细胞的方法称为营养互补选择法。 66杂交瘤技术：骨髓瘤细胞与免疫淋巴细胞融合制自考现代生物制药技术
备杂种细胞的方法为杂交瘤技术。
67杂合瘤：骨髓瘤细胞与免疫淋巴细胞融合制备的杂种细胞称为杂合瘤。 68微载体培养法：将细胞吸附于微载体表面的培养方法。
69酶工程：应用酶的特异性催化功能并通过工程化为人类生产有用产品及提供有益服备的技术为本酶工程。
70酶：生物体内具有特殊催化功能的蛋白质称为酶。 85肿瘤坏死因子：是一种由巨噬细胞分泌能产生细胞素，使肿瘤细胞溶解的因子。
86干扰素：是一类在同种细胞上具有广谱抗病毒活性的蛋白质，其活性的发挥又受细胞基因组的调节和控制，涉及RNA和蛋白质的合成。
87集落刺激因子：CSF为一组糖蛋白物质，由淋巴细胞和单核细胞自然产生，有刺激红细胞系以外造血细胞增殖和分化的作用。
质粒。
11．雄性大肠杆菌表面的性纤毛是一种接合质粒形成的表面物质。 12．根据质粒在细胞中拷贝数的不同，可把质粒分为松驰型质粒和严紧型质粒。 13．严紧质粒大多为具有自身传递能力的大质粒。 14．分子量较大，自身传递上严紧型质粒的特点。 15．分子量较小，不具自身传递性是松驰型质粒的特点。 16．基因工程中使用的质粒39．大肠杆菌DNA连接酶只能催化DNA双链的单链缺口和带粘性末端的双链DNA。
40．TDT即末端脱氧核苷酸转移酶。
41．DNA连接酶的最适温度
0
是37C。 42．连接反应温度应介于催化反应与末端粘合之间。 43．根据受体系统不同，基因工程可分为微生物基因工程、动物基因工程和植物基因工程。 44．关于感受态本质的假说71固定比酶：限制或定位于特定空间位置的酶称为固定化醇。
72固定化细胞：被限制或定位于特定空间位置的细胞称为固定化细胞。
73载体结合法：将细胞悬浮液直接与水不溶性毂体相结合的固定化方法。 74包埋法：将细胞定位于凝胶网格内的技术称为包埋法。
75偶联效率：偶联固定化反应过程中载体结合蛋白质的能力称为偶联效率。QQ：806235356 76酶活力：醇类催化特定化学反应的能力称为酶活力。
77酶比活：指每毫克酶蛋白所表现的活力。
78固定化反应的酶活力回收串：固定醇所显示的活力与加入偶联液中酶总活力的比值称为固定化反应的酶活力回收率。
79酶试剂盒；将酶、反应试剂、稳定剂、激活剂，填充剂、及缓冲剂等配成检测用的混合制剂称酶试剂盒。 80细胞因子：是人类或动物的各类细胞分泌的具有多样生物活性的因子，是可溶性物质，是一组不均一的蛋白质分子，能调节细胞的生长与分化。
81白细胞介素：由白细胞或其它细胞产生的又在白细胞间起调节作用和介导作用的因子。
82.IL-3：即白细胞介素3，由激活的T淋巴细胞产生，能刺激多能造血干细胞和各系细胞的分化和增殖，促进和维持肥大细胞的增殖，增殖中性粒细胞、酸性粒细胞的活性，促进NX细胞杀伤实体瘤的活性。
83.IL-10：由TH2细胞产生，能抑制TH1细胞合成因子的能力，是一种糖蛋白。 84.IL-12：是由B淋巴细胞分泌的一种细胞因子，分子量为75KD的糖蛋白，其主要作有得促进PHA活化的PBMC增殖以及亚适剂量IL-2协同促进作用。 88超诱导：是指细胞在某都是松驰型质粒。 种大分子合成抑制物的适17．松驰型质粒可被氯霉素当作用，诱生蛋白合成增加扩增。 的现象。
18．细菌收获可通过离心进89生物反应调节剂：是生行。
物体体内的某些细胞和某19．细菌裂争可采用：非离些分子，它们既是机体对内子型或离子型去污剂，有机外环境刺激应答的效应机溶剂，碱处理及加热处理。 制，也是机体维持内环境的20．λ噬菌体长约48.5kb。 稳定因素。 21．野生型λ噬菌体为双链
线形分子，具有12个碱基
二、知识点 的粘性末端，进入大肠杆菌
包括局部原生质体化假说及酶受体假说。 45．大肠杆菌感受的制备方法包括Hanahan法，氯化钙法及电转化法。 46．局限性转导只能转导宿主染色体上少数基因。 47．普遍性转导可转导宿主染色体上任何基因。
48．β-半乳糖基因插入失活法的重组质粒产生白色菌落。
49．不带β-半糖苷酶活性蛋白的菌落中央也可出现淡蓝色斑点。 50．动植物病毒也可作为外源基因的载体。 51．目的基因重组克隆的筛选方法包括：根据重组体表型筛选，重组体结构分析法，检测目的基因法及检测目的基因表达产的法。 52．原核生物中基因表达以操纵子形式进行。
53．原核生物细胞没有核膜，因此表达过程中的转录与翻译往往同时进行。 54．原核生物的mRNA在翻译完毕之后，随即被水解掉。
55．真核生物转录成不均-RNA之后，还需加工，如
去掉内含子，修饰，加工5，
，
末端和3，
末端。 56．基因工程中基因表达的研究，是指外源基因在某一种细胞中的表达活动。 57．大肠杆菌，酵母与哺乳动物细胞三大基因表达体系已成为当前基因工程工业性生产的核心。 58．基因表达合成功能蛋白的基本条件是依赖于基因的有效转录，mRNA正确的转译和转译后的加工。 59．阅读框架是由起始密码子决定的。 60．用于保证目的基因处于正确的阅读框架中的方法有：选用适当的酶切位点；用人工接头调节阅读框架；构建一组适合不同阅读框架的载体。 61．基因的表达受到启动子等调控元件的控制。 62．基因的高效表达必须依赖一个强的启动子。 自考现代生物制药技术
63．适当的启动子，只能保证目的基因的正确转录，而并不能保证基因的完全正确表达。 64．对已知功能的基因表达产物的检测，可以采用蛋白质电泳，免疫扩散和凝集，酶联免疫和放射免疫等方法。 65．对未知目的基因功能的表达产物的检测方法是在18．水的主要生理功能是参与代谢反应，作为反应的价质，提供氢、氧元素；参与物质运输；传递热量，调节体温。 19．培养基中的生长因素的主要功能是作为酶的重要组成成分。 20．化学物质来菌只适用于局部空间或某些器械消毒。 21．用于辐射灭菌的射线有性营养环境不利于放线菌
孢子形成。
43．一般情况下，干燥和限制营养可直接或间接诱导放线菌孢子形成。
44．霉菌的孢子培养，一般以大米、小米、玉米、麦米、麦粒等天然农产品为培养基。 45．细菌的斜面基多采用碳源限量而氮源丰富的配方。 4．植物细胞实验室培养法是悬浮、微室、平板、看护、悬滴及单花粉等多种培养方式。
5．悬浮培养特点是培养过程中，细胞总数不断增加，一定时间后产量达最高点，生长趋于停止。
6．植物细胞接种浓度通常
4
4为2.5×10～5.0×10细胞/毫升。
携带有重组体分子的细胞中寻找新合成的蛋白质。 66．应用大细胞系统检测基因表达时，主要是利用质粒或λ载体扩增的途径。 67．微细胞不含有染色体DNA。
68.HbsAg是指乙肝表面抗原。
69．HGH是指人生长激素。 70．HGH可以治疗侏儒症，促进烧伤及骨折等创伤性组织的恢复。
7．植物细胞单细胞培养技术有平板培养法，微室培养法、看护培养法等。
8．微室培养法的优点是可直接观察分裂繁殖及分化全过程，胞质环流规律及线粒体生长与分裂活动，亦可进行连续观察原生质体融合，细胞壁再生及融合后细胞分裂活动，同时可进行显微摄像。
9．看护培养法培养时间较微室培养长。 10．细胞突变的主要原因是染色体缺失、重复、倒位、异位、碱基顺序转换、颠换及移码所引起。 11．植物细胞培养物易发生自发突变，其突变频率在10-7～10-6
之间。 12．人工诱发植物细胞突变的化学因素主要有碱基类似物、烷化剂、抗生素等。 13．筛选植物突变细胞的目的在于获得某些药物高产细胞株或某些物质转化的高产酶细胞株。 14．筛选细胞突变体主要依据细胞表型变化。 15．自离体植物细胞培养物中筛选细胞突变体的方法有直接选择法，间接选择法及绿岛法。 16．植物细胞培养物处于无组织无器官分化的分散状态时许多重要基因并不表达。 17．目前已建立植物细胞种质保存法有：干燥保存法，液体石蜡覆盖法，低温保存法，低压低氧保存法及超低温深冻保存法。 18．超低温深冻保存法系将
植物种质于-1960
C的液氮中保存。
19．常用的冻冻保护剂有DMSO，甘油，PEG，葡萄糖、山梨糖及蔗糖。 20．为提高存活力，冻存材料应选用抗寒力强的幼龄培养细胞。
21．对于种子、花粉、球茎等高度脱水材料可以采用快速降温的冻存。 22．对于不耐寒植物细胞需采用慢速冰冻法。 23．对于木本植物冬芽冻存
物需于00
C慢速化冻。 24．深冻细胞活力及存活率测定的方法有再培养法、二醋酸荧光素染色法及氯化自考现代生物制药技术
三笨四氮唑还原法。 25．再培养法是检查细胞活力的根本方法。 26．植物原生质体制备的材49．以组织块为材料的培养方法叫组织块培养法。 50．细胞培养包括细胞及细胞团块单层培养及单细胞程谓之电场诱导融合作用。 72．完整细胞间融合是扩大生物变异的有效手段。 73．两种完整细胞融合时，95．微载体培养优点在于兼有固定化培养与悬浮培养的双重特点。
95．动物细胞生长缓慢，又料应用较多的是叶片，愈伤组织及悬浮培养细胞。 27．高等植物细胞壁主要成分为纤维素，其次为半纤维素，果胶质及蛋白质。 28．植物原生质体制备时的脱壁酶有纤维素酶，果胶酶，斗纤维素酶，蜗牛酶及崩溃酶。
29．纤维素酶使用时的pH值为5.4。
30．果胶酶最适pH值为5.8。 31．纤维素酶及果胶酶混合使用的pH值为5.4～5.6之间。
32．脱壁酶液采用0.45μm微孔滤膜过滤除菌。 33．纯化植物原生质体的方法有离心法、飘浮法、界面法及滴洗法。 34．植物原生质体活力测定方法有：根据形态特征判断其活力，活体染色法及光染料活体染色法。 35．大多数植物原生质培养1～3day，即再生新细胞壁。 36．大多数植物原生质体通常在1～2周内发生
具有锚地依赖依。 96．组织纤维溶酶原激活剂是一川丝氨酸蛋白酶。 97．抗乙型肝炎表现抗原单克隆抗体是专一性识别HbsAg的单一抗体。 98．体外法生产单克隆抗体是使杂交瘤细胞在人工反应器内大规模培养并表达相应抗体。 99．体内法生产克隆抗体是利用生物体为细胞反应器大规模培养杂交瘤细胞生产抗体的方法。
100．检出分泌特异抗体细胞后，应即时进行克隆化筛选与鉴定，以免非必需细胞过分生长。QQ：806235356
定的是IFNa。 37．干扰素的受体主要存在于细胞膜中。
38．白介素-2的生物学作用主要是刺激细胞增生。 39．酵母属于真核生物，大肠肝菌，放线菌及兰细菌等属于原核生物，但它们均为单细胞生物。
40．NK细胞对射线照射最为敏感。
41．CTL细胞对射线照射最为敏感。
42．B细胞具有表面球蛋白，而T细胞、NK细胞，K细胞的表面则不具有表面球蛋白。
44．TNF对蛋白酶最为敏感。 45．具有生物活性的肿瘤坏死因子为三聚体构型。 46．细胞因子使用的最终效应部位在细胞的细胞核内。 47．细胞因子多为单链分子，其基因多由多个外显子和内含子组成，但其基因均为单拷贝。
48．IL-5对细胞的作用包括增强B细胞的功能，促进活性B细胞分泌，并可诱导B细胞表达IL-2受体。 49．IL-8可来源于单核细胞、巨噬细胞、肺泡巨噬细胞、血管内皮细胞、T细胞等。
50．IFN的蛋的产物包括IFN-α，IFN-β及IFN-y。 51．IFN-β在成纤维细胞中诱生。
52．IFN也可诱生IFN。 53．TNF也可诱生IFN。 54．IFN可抑制病素的生活周期的许多阶段，包括病毒的吸附和脱壳、早期病毒转录、病毒转译、蛋白合成及从细胞表面芽生。
55．EPO的主要来源为肾小管，肾间质细胞。 56．可导致EPO生成增加的因素包括高原气候、冠心病、肺心病、溶血性贫血等。 57．细胞因子研究发展前景包括细胞因子的加工改造，细胞因子的受体及其免疫调节的信息传递，细胞因子基因表达的调控，分子水平上了解在疾病治疗中的作用以及作为有效的免疫佐自考现代生物制药技术
剂。 58．天然干扰素是一种糖蛋白。
59．干扰素对蛋白酶敏感。 60．干扰素可导致病毒繁殖中断。 61．干扰素具有广泛的抗病毒活性。 62．干扰素基因在正常生理状态下不表达。
63．IFN对免疫功能的调节作用包括增强巨噬细胞活力，使补体水平下降及延长同种移植物的排斥反应。 84．细胞因子很难用常规方法纯化。
86．TNF具有抗肿瘤作用。 87．诱导TEF合成须经过两个阶段：起动期、促发期。 88．TNF经鉴定有两类：TNFα，TNFβ。
89．TNF分子量因来源不同，制备方法不同及测定方法不同相差较大。
90．TNF与其它细胞因子，化疗药物联合作用可以降低TNF剂量及副作用，提高疗效。 制，是以双链DNA库间媒介；利于体外纯化；（2）不论单链DNA还是双链复制形式DNA均能够感染大肠杆菌；（3）单链DNA噬菌体颗粒的大小，是受其DNA多制约，而不存在包装限制问题；（4）可以容易地测定出外源DNA片段的插入取向。
9．T4DNA连接酶的作用机制： （1）T4DNA连接酶与辅因子ATP形成酶-AMP复合物；25mMTris-HCL(pH8.0),10m
M EDTA Ph8.0）中剧烈振荡；（4）加200μl亲配制液溶液II（0.2M NaOH1%SDS）,混合内容物，不要振荡，置冰上；（5）加150μl冰预冷溶液III（5M Kac60ml,冰乙酸11.5ml,水28.5ml），温和振荡10s置
0
于阔步3-5min；（6）4C。12000rpm离心5min，转移上清；（7）上清加等量酚；
0
氯仿抽提，4C，12000rpm离心2min，收集上清；（8）64．人白细胞干扰素制剂的半成品检定包括比活性测定、无菌试验、余毒试验、安全试验及硫氰酸钾残余量检测。 65．干扰素制剂大剂量使用的最佳途径是批注，皮下注射。 66．干扰素制剂的局部用药多采用喷雾、贴敷、滴鼻。 67．干扰素临床应用的适应症包括急性病毒性感染、慢性病毒性感、恶性肿瘤、器官移植患者、乙型脑炎等。 68．T细胞的激活与增殖包括三个时期，即细胞产生白介素-2及其受体表达，细胞进入不依赖白介-2的增殖期。
69．白介素-2的临床应用包括抗病毒感染、抗细菌感染、抗肿瘤及艾滋病的治疗等。 70．关于集落刺激因子的特性，目前认为四种集落刺激因子无序列同源性，均为糖蛋白分子，四种集落刺激因子各有特征的膜受体。 71．红细胞生成素的临床应用包括慢性肾功能衰竭、类风湿性关节炎、癌性贫血、早产婴儿自体输血及用于外科手术的辅助治疗等。 72．细胞因子大都是糖蛋白类物质。 73．糖基成份对细胞因子活性影响不大。
74．IL-lα与IL-1β可识别相同的受体。
75．LPS可诱导单核细胞但不能诱导皮肤纤维母细胞产生IL-8。 76．去除糖链后IL-10的抗原性不受影响。
77．TNF发挥作用有相对的细胞周期特异性。
78．TNF直接注入是很有效的。 79．体内IFN通常在严格的诱导控制下产生。
80．IFN可以抑制正常细胞的生长。
81．对晚期癌症IFNy不优于IFNα。 82．体外实CSF可引起肿瘤细胞增殖。 83．高原居民的EPO年成增加。
（2）酶-AMP复合物再结合
三、重点问题 到具有5，一磷酸基与3，
羟1．重组DNA技术通常包括： 基切口的DNA上，使DNA（1）基因重组载体的选择腺苷化。（3）产生一个新的和制备；（2）目的基因的分磷酸二酯键，把缺口封起离纯化；（3）目的基因与载来。
体的重组；（4）重组克隆的10．DNA连接反应中的注意转化与感染；（5）重组克隆事项：
的筛选与鉴定；（6）目的基（1）连接及反应温度；（2）因的表达及表达产物的分防止粘末端的自身环化应离与提纯；
采取以下措施：①控制载体2．载体的基本条件： 与外源DNA分子的浓度与（1）本身是一个复制子，比例；②用碱性磷酸酶处理能自我复制；（2）分子量要载体防止自身环化；③定向小；（3）带选择标记，以便克隆；（3）用λDNA和科斯进入宿主细胞后有可辨认质粒的载体时的连接；①λ的表型特征；（4）对几种限DNA载体应考虑两个参数：制性酶有单一切点：（5）有插入分子左右臂的比例，两一定的非必要区，在这段插者的浓度；②科斯质粒常用入外源基因不影响其复制。 两种方法连接，一种是用碱3．可作为载体的有： 性磷酸酶处理，另一种是多（1）质粒；（2）λ噬菌体；酶反应进行的克隆。 （3）M13噬菌体；（4）科11．受体细胞一般具有的性斯质粒；（5）动、植物病毒。 能：
4．选择裂解细菌的方法取（1）有接受外源DNA的能决于：
力；（2）限制系统缺陷或限（1）质粒的大小；（2）大制与修饰系统均缺陷型；肠杆菌菌株；（3）裂解后用（3）DNA重组缺陷型；（4）于纯化质粒DNA的技术； 不适于在非培养条件下生5．选择裂解细胞的一般准存。
则：
12．DNA分子转化机理： （1）大质粒（大于15Kb）（1）吸附：完整的双链DNA易受损，故应采用温和裂解分子吸附在受体菌的表面；法（SDS裂解法）从细胞中（2）转入：双链DNA分子释放出来；
解链，单链DNA进入受体（2）对于小质粒，可加入菌，另一链降解；（3）自稳：EDTA后采用溶菌酶处理，外源质粒DNA分子在细胞再通过煮沸或碱处理使之内又复制成双链环状DNA裂解。
（4）表达：供体基因随同6．λ噬菌体作为克隆载体复制子同时复制，并被转录的特点是：
和翻译。 （1）λ噬菌体可在体外包13．基因表达的三个基本条装成病毒颗粒，高效地转染件：
大肠杆菌；（2）λDNA的长（1）基因的密码区不能被度只有在野生λ噬菌体的插入序列所中断；（2）基因75%-105%之间才能够包装；必须在启动子控制之下；（3）λ噬菌体适于克隆大（3）mRNA必须相当稳定并片段DNA及组建基因文库。 有效转译，产生的外源蛋白7．科斯质粒的特点是： 不被宿主很快降解。
（1）具有λ噬菌体的特性，14．碱裂解法制备质粒DNA能高效地转染宿主细胞，但的方法：
它不含λ噬菌体的全部必（1）接种菌落于含抗生素要基因，不能裂解生成噬菌的LB中，370
C剧烈振荡反斑；（2）具有质粒载体的特应；（2）培养液性，带有质粒的抗性基因而40
C12000rpm30min离心；易于筛选。
（3）重悬细菌于100μl8．M13载体的优点： 冰预冷的溶液I（50mM葡萄（1）单链DNA噬菌体的复
糖，
加入2倍体积乙醇，振荡混合，室温放置2min；（9）40
C，12000rpm，离心5min，弃上清；（10）倒置离心管，倾干液体；（11）1ml70%乙
醇40
C洗涤沉淀，弃上清，空气中干燥10min；（12）用500μl含无DNA酶的胰RNA酶（20μg/ml）的TE重新溶解核酸，振荡，贮于
-200
C。 15．配制工业发酵培养基的一般要求：（1）营养物质的组成比较丰富，浓度恰当，能满蹉力种发芽和生长繁殖成大量的有生理功能的菌丝体之需要；（2）在一定条件下，所采用的原料彼此之间不发生化学反应，理化性质相对稳定；
（3）粘度适中，最有适当的渗透压；（4）要考虑所采用的原材料的品种和浓度，与代谢产物生物合成过程中的调节关系；（5）生产过程中，既不影响通气与搅拌的效果，又不影响产物的分离，精制，以及废物的处理。（6）原材料尽量做到因地制宜，质优价廉，成本低。 16．培养基的配制原则：1）营养成分配制原则：2）营养成分配比应恰当；（3）渗透压应合适；（34）pH值应合适；（5）氧化还原电位需符合要求。 17．工业微生物筛选一般要求：（1）稳定而高产的遗传特性；（2）抗噬菌体能力强；（3）发酵过程泡沫少；（4）需氧量低；（5）底物转化率高；（6）对培养基和前体耐受力强；（7）营养特性；（8）最适温度高；（9）菌种既要高的遗传稳定性，又要有基因操作的可修饰性；（10）产物微生物常用的分离筛选途径： 18．工业微生物常用的分离筛选途径：（1）从菌种保存机构的已知菌种中分离；（2）从自然界中分离筛选；（3）从生产过程中分离筛选。
19．单孢子悬液的制备方法：（1）对于细菌，因其在固体斜面培养基上常粘在一起，故要求转接到新鲜肉自考现代生物制药技术
汤液体中进行培养，以取笪分散且生长活跃的菌体；（2）对放线菌和霉菌的孢子，采用玻璃珠或石英砂振荡打散孢子后，用滤纸或棉花过滤。 20．原生质体融合技术的特点：（1）打破物种界限，可实现远缘杂交；（2）可实现两上以上同种或不同种微生物细胞融合；（3）原生质体易于受到诱变剂的作用而成为较好的诱变对象；（4）可使重组频率大大提高。
21．微生物菌种保存方法：及基因型变异；2）森林及土地无止尽开发利用，自然种质库破坏，需建产人工种质库；（3）细胞工程中获得的中草药及农作物优良品种的特殊变异细胞及杂种细胞，常规保存法易于变异，需进行种质资源广泛收集与长期保存；（4）细胞培养建立的人工种质库可节省土地与劳务。 29．植物原生质体制备的预处理方法：（1）预质壁分离；（2）预培养；（3）暗处理；（4）光处理；（5）低温处理； 38．动物细胞融合的基本过
78
程：取数量(10-10个/ml)的两种亲本细胞充分混合，离心除去上清液，取下层细胞悬液0.1ml，逐滴加入
0
0.4ml37C的40%PEG溶液，0
37C静置90s，缓慢加入5-10ml无血清培养液，轻摇离心管4-5次，离心去上清液，按每0.1ml融合混合液加25ml完全培养基，以每孔0.1ml分装于96孔培养板及每孔0.5ml分装于
0
24孔培养板上，于37C CO2培养箱中培养之。 39．脂质体介导的细胞融合量与常规单层培养相同，通
过增加培养罐体积即可达到扩大培养规模的目的，减少厂房及设备投资，节约动力消耗及人力，又便于对反应系统进行检测控制。 46．利用有限稀法筛选杂交瘤细胞的过程：于克隆前一日向96孔板中加入0。1ml
2细胞悬液，于37℃CO培养箱中温育，然后从阴性孔中吸取细胞计数，用完全培养基稀释成30个／ml加入96孔板中，每孔0.1ml，余下细胞再稀释成10／ml，再加于两块96孔板中，每孔（1）斜面低温保藏法；（2）液体石蜡封存法；（3）沙土管保存法；（4）冷冻干燥保存法；（5）超低温保藏法。 22．工业微生物表面培养法的优缺点：（1）优点：①简单易行；②投资少；③适于小型生产（2）缺点：①劳动强度大；②占地面积大；③产量低；④易污染。 23．工业发酵中提高发酵液的溶氧水平的措施：（1）提高通气强度；（2）增加搅拌转速；（3）增加罐压；（4）增加挡板；（5）通气中掺入纯氧；（6）控制基质培养基；（7）控制补料率；（8）调节温度；（9）添加表面活性剂；（10）中间补水；11）液化培养基。 24．影响微生物原生质体制备的因素：1）菌体的预处理；（2）菌体的培养时间；3）酶浓度；（4）酶解温度；（5）酶解时间；（6）渗透压稳定剂。 25．微生物工程产品主要类型：（1）微生物菌体；（2）初级代谢物；（3）次级代谢物；（4）生物活性大分子； 26．微生物工程在医药工业中的应用：（1）抗生素类；（2）氨基酸类；（3）核苷酸类；（4）维生素类；（5）甾体类激素；（6）治疗酶及酶抑制剂。
27．植物细胞培养的特性：（1）植物细胞较微生物细胞大得多，有纤维素细胞壁，细胞耐拉不耐扭，抵抗剪切力差；（2）培养过程生长速度缓慢，易受微生物污染，需用抗生素；（3）细胞生长的中期及对数期，易凝聚成团块，悬浮培养较难；（4）培养时需供氧，培养液粘度大，不能耐受强力通风搅拌；（5）具有群体效应，无锚地依赖性及接触抑制性；（6）培养细胞产物滞留于细胞内，且产量较低；（7）培养过程具有结构与功能全能性。
28．种质保存意义：（1）植物组织及细胞移植继代培养过程可能导师致染色体30．植物细胞生长所需的营过程：动物细胞破碎后，经养成份：H2O、无机营养物、差分分离出线粒体及溶酶维生素、碳源、天然物、植体等细胞器，或采用生化技物激素、氨基酸类、核酸及术分离出的DNA，mRNA，逆其水解物以及其它成分。 转录酶及其它生物大分子30．制备原生质常用酶：（1）并将其包装成脂质体，然后纤维素酶；（2）果胶酶；（3）按完整细胞之间的融合方崩溃酶；（4）半纤维素酶；式，将脂体与另一种细胞融（5）蜗牛酶。 合，即或获得相应杂种细31．测定植物原生质体活力胞。 的方法：（1）根据形态特征40．杂种动物细胞筛选系统判断其活力；（2）活体染色及方法：（1）HAT选择系统；法；（3）荧光染料活体染色（2）抗药性筛选系统；（3）法。 互补选择法；（4）原位杂交32．植物细胞分化培养基与法；（5）基因探针选择法。 原生质体培养基的差别：41．动物杂种细胞遗传表现（1）分化培养基中只有蔗型：（1）互补作用是指两种糖为碳源，不加渗透压稳定亲本细胞生物学特征在杂剂；（2）原生质体培养基中，种细胞中共同表达的现象；生长素浓度高于细胞分裂（2）激活作用是指一个亲素浓度，分化培养基正相本细胞的非活动基因在杂反；
种细胞中得到表达的现象。33．植物细胞融合的特点：（3）消失作用指亲本细胞（1）可以实现远缘杂交，某些遗传性状在杂种细胞获得种间杂种，克服有性杂中消失的现象；（4）激活与交配系不亲和性；（2）可获消失作用指在杂种细胞中得另一亲本非整倍性杂种原亲本非活动基因被激活，或胞质杂种，且获得的遗传而同一亲本某些遣传性状变异范围极广；（3）一次操同时消失的现象。 作可实现两个以上亲本的42．MCAb的基本特性：（1）融合作用；（4）可获得呈现MCAb为高纯度单一抗性，双亲个体基因型总和的杂检测灵敏度极高；（2）可通种；（5）可形成有性生殖障过杂交瘤大规模培养进行碍植物种间杂种；（6）获得生产；（3）杂交瘤可用液氮具有不同后生遗传变化亲深冻法长期保；（4）可在分本的杂种。 子水平上解析出存在于病34．筛选植物杂种细胞的方毒表面的抗原或受体；（5）法；1）遗传互补筛选法；可用不纯抗原制备纯（2）抗性互补筛选法；（3）MCAb；（6）但MCAb专一性利用物理特性筛选法；4）太强，难于检出微生物突变利用生长特性筛选法。 株，有时不能产生与抗原交35．动物细胞培养包括：（1）联的功能易受PH
、温度及盐组织块培养法；（2）细胞单浓度影响，又亲和力较低，层培养法；（3）单细胞分离半衰期短，又需长期持之以培养；（4）二倍体细胞株培恒的艰苦工作。
养。
43．单克隆抗体生产技术；36．二倍体细胞特征：（1）（1）体外培养法；（2）体具有两倍性染色体（2n），内培养法。 组型正常；（2）培养条件下44．无血清培养基分类：（1）呈有限生命力，不能无限期基本合成培养基；（2）基本分裂繁殖；（3）无致癌性。 合成培养基加生长因子；37．动物细胞融合过程的促（3）基本合成培养加组织融因素：（1）病毒诱导融合；抽提物。 （2）PEG诱导融合；（3）45．微载体培养的优点：兼电场诱导融合；（4）聚乙烯有固定培养与悬浮培养双醇分离心力也能促进融合。
重特点，培养过程细胞产物
板中，每孔0.1ml。再制备3个／ml细胞悬液，加入另外两块96孔板中，将上述
各板置37℃CO
2培养箱中培养2-3周，待出现可见细胞集落后，检查培养液中抗体活性，选出阳性孔，扩大培养，如上法进行反复克隆，直至选出纯杂交瘤细胞为止。 47．动物细胞培养过程中所具有的特性：（1）细胞生长缓慢，易受微生物污染，培养时需用抗生素；(2）动物细胞较微生物大得多，无细胞壁，机械强度低，适应环境能力差；(3）培养过程需氧量少，且不耐受强力通风与搅拌；(4）在机体中，细胞相互粘连以集群形式存在，培养过程具有群体效应、锚地依赖性、接触抑制性及功能全能性；（5）培养过程产物分布于细胞内外，反应过程成本较高，但产品价格昂贵；（6）大规模培养时，不可套用微生物反应的经验；（7）原代培养细胞一般繁殖50代即退化死亡。 48．深冻植物细胞复苏后测其生命活力与存活率的三种方法：
（1）再培养法：将复苏后细胞立即接种于新鲜培养 基上再培养 ，同时测定细胞增殖量，愈伤组织形成情况及人化为新植株能力； （2）二醋酸光素染色法：用1滴0.1%荧光素染料溶液与一滴化冻后细胞悬浮液混合，活细胞染色，死细胞不着色，用普通显微镜观察计数得细胞总数，用紫外光显微镜观计数得活细胞数，据此可计算出冻存细胞存活率；
（3）TTC法：根据活细胞内脱氢酶可将氯化三苯四氮唑还原为for mazam,后者溶于乙醇而不溶于水，故前者与冻细胞保温反应用乙醇抽提，再用分光光度法测定吸收度，用以判断细胞存活率及生活力。 49．动物细胞固定化培养的优点：（1）细胞可维持在较自考现代生物制药技术
小体积培养液中生长；（2）细胞损伤程度低；（3）易于更换培养液；4）细胞和培养液易于分离；5）培养液中产物浓度高，简化了产品分离纯化操作。
50．中空纤维培养器优点：（1）细胞生长密度高；（2）营养牧质可有效分布，代谢产物可及时排除；（3）细胞培养可达数日，易于实现连续培养；（4）细胞分泌蛋白质浓度高；（5）反应器体积小并可用于培养多种细胞。 液，混合均匀，再冷却凝固成型和破碎即成固定化酶； (2)微囊化包埋法是将醇定位于具有丰透性膜的微小囊内的技术，其基本制备方法有界面沉降法及界面聚合法两类。
58.固定化酶反应器：(1)搅拌罐型反应器；(2)固定床型反应器；(3)流化床型反应器；(4)膜型反应器；(5)鼓泡塔型反应器； 59．固定化酶的形状：（1）颗粒状固定化酶；（2）纤维应液，置于沸水中，加热使
酶失知；（2）立即加入适宜的酶变性剂，使酶变性失活；3）加入酸或碱溶液，使反应液的pH值迅速远离酶催化应的最适pH值；（4）将取出的反应液立即置于冰，或冰盐溶液中，使反应
0
液的温度迅速低至10C以下。
63．酶与一般催化剂相比，所具有的优点：（1）催化效率高；（2）专一性强；（3）反应条件温和；（4）酶的活体酶的合成，释放增强，促
进过氧化物酶合增强；（3）可促使白血病细胞分化及抑制白血病细胞生长。 74．集落刺激因子的临床应用：（1）治疗血细胞减少症；（2）治疗再生障碍性贫血、骨髓发育不良和自体骨髓移植后的恢复；（3）治疗癌症；（4）治疗AIDS。 75．细胞因子受体的信息传递途径：（1）通过受体本身的酷氨酸激传递递信息；（2）通过
息。 76．用于制备细胞因子的培养细胞标准十分严格，对这些细胞的要求包括：（1）细胞来源要清楚；（2）细胞建株的鉴定资料要记录清楚；（3）了解细胞系的生长特性和在培养条件下的细胞的稳定性；（4）培养细胞时所用的血清不含细菌、病菌、真菌和支原体。 77．干扰素的基本特性：（1）种属特异性；（2）作用广谱性和选择性；（3）相对无害性；（4）特殊稳定性。 78．真核基因在原核细胞中获得表达必须具备的三个条件：（1）要有原核细胞的启动子；（2）要有能与原核细胞16SrRNA3’端相配合的顺序；（3）表达的干扰素多肽要不被细胞酶类所迅速降解。
79．IL-2的生物学作用：（1）促T细胞增殖；（2）对自然杀伤细胞（NK）的作用；（3）诱导细胞毒性T淋巴细胞产生和增殖；（4）诱导淋巴因子活化淋巴细胞产生；（5）促B细胞增殖分化作用；（6）IL-2与其他白介素协同作用。
80．集落刺激因子的功能：（1）刺激造血细胞增殖；（2）维持细胞存活；（3）分化定型；（4）刺激终末细胞的功能活性。 81．三种检测重组基因工程CSF的方法（1）生物学检测法；（2）分子生物学检测法；（3）免疫学检测法。 82．TNF抗肿瘤作用的可能机制：（1）细胞的直接细胞毒及细胞生长抑制作用；（2）肿瘤内血管阴塞引起肿瘤缺血性坏死；（3）TNF的免疫调节作用可能在其抗瘤效应中起一定的作用。QQ：806235356 83．细胞因子共有特性：（1）多源性；（2）多效性；（3）高效性；（4）快速反应性；（5）理化性质：①化学本质为大分子多肽或蛋白；②多为单链分子；③多具有“分泌型激素”的特性；④基因多由数个外显子和内含子组成；⑤基因均为单拷自考现代生物制药技术
贝；⑥分子量均小于80KD。 84．细胞因子的受体，根据其结构特点和功能分类：抗细菌、抗真菌作用；（8）热原质作用；（9）参与骨质重吸收。
种蛋白质的结构基因与调节基因广泛地存在于脊椎动物以上的细胞内，在一般2激活的细胞表面抗原标
志，也说明LAK杀伤肿瘤细胞效应是白介素—2激恬（1）细胞因子受体的新家族；（2）肿瘤坏死因子受体家族；（3）免疫球蛋白超级家族受体； 85．基因工程细胞因子制备的基本步骤：1）制备含特异性细胞因子基因的cDNA文库；（2）从cDNA文库中筛选目cDNA克隆；（3）构建表达性载体，制备高级表达性工程菌（细胞）。 86．干扰素的生物功能本质：（1）抗细胞内侵害；①抑制病毒繁殖；②抑制胞内的其它微生物繁殖；（2）抗细胞分裂活性；（3）调节免疫功能活性；①调节免疫监视功能；②调节免疫自稳功能； 87．基因工程干扰素的制备方法：（1）干扰素工程菌的组建；①分离提取干扰素基因；②制备人工重组质粒；③转化宿主菌；（2）基因工程干扰素的制备；（3）基因工程干扰素的质量控制； 88．集落刺激因子的检测方法：（1）生物活性检测法；①骨髓细胞集落形成法；②依赖细胞株；（2）分子生物学检测法；斑点杂交法；（3）免疫学检测技术；双抗体夹心ELISA法。 89．CSFs制检的一般步骤：（1）制备工程菌（或细胞）；2）工程菌（或细菌）的培养；（3）分离纯化；①工程菌的破碎，沉淀；②离心；③层析：离子交换层析、亲和层析；④超滤浓缩，分子筛层析；（4）除菌过滤，分装，冻干；（5）半成品检定，主要包括下列检定项目：①蛋白含量测定②活性测定③比活性测定；④分子量测定；⑤纯度测定；⑥核酸含量测定；⑦鼠lgG含量测定；⑧等电测定；⑨无菌试验；⑩热原质等检定项目；（6）成品检定：①外观检查；②活性测定；③水分测定；④无菌试验；⑤安全毒性试验；⑥热原质试验；⑦肽图测定等检测等检测项目；（7）分包装；（8）贮存。 90．红细胞生成素的测定方法：（1）生物体内测定法；（2）生物体外测定法；（3）放射免疫测定法。 91．肿瘤坏死因子生物学活性：（1）抗肿瘤活性；①TNF直接抗肿瘤细胞的作用；②TNF在体内的抗肿瘤作用；（2）抗炎症活性；（3）促凝血活性；（4）对脂肪细胞合成脂蛋白脂酶（LPL）和LPL活性的抑制作用；（5）促进细胞因子分泌；（6）免疫调节作用（7）抗病毒、92．IL-13的作用：（1）强生理状态下，细胞的干扰素烈报制外周血单核细胞分基因呈静止状态，只有在特泌IL-
6、IL-1β、TNF-α、定诱生剂的作用下，细胞的IL-8和gro-β；（2）能抑干扰素基因才活动，转录合制细胞培养分化的巨噬细成相应的mRNA，进而转译胞产生HIV，并能抑制体外出具有种属特异性的干扰HIV复制；（3）较小程度直素蛋白； ③干扰素本身并接作用于大颗粒淋巴细胞不能直接灭活病毒，干扰素（LGL）合成IEN-y，并与作用于细胞后，使后者又产适量和亚适量的IL-2的协生多种其它蛋白质(抗病毒同作用；（4）它能影响B蛋白)，从而阻断病毒的繁淋巴细胞，增强其增殖并能殖； ④干扰素必须具有广表达CD23表面抗原；（5）谱的抗病毒活性，如果某一有抗炎作用（败血性休克和种抗病毒物质仅对特定的风湿性关节炎）并刺激体液病毒有作用，就不能称为干免疫应答；（6）增强由IL-2扰素。
诱导产生的细胞因子激活96．人淋巴细胞几—2的制的杀伤细胞活性。 备产物检定方法：
93．基因工程重组细胞因子 (1)活性检定：采用CTLL的制备质控：(1)详细记录细胞株的
3H掺人法进行活表达载体和宿主细胞，包括性测定，比活性必须在克隆基因的来源和鉴定，以106IU／mg以上；
及表达载体的构建、遗传学 (2)纯度检定：①SDS—和结构等，此外还要介绍载PAGE检测，用银染色，在体引入宿主细胞的方法，和15KD处呈单一条带，后扫载体在宿主细胞中的状况； 描测得几—2条带占95％(2)应有详细的插入基因和以上；
表达载体侧翼调控区核苷 ②HPLC检测，反相柱(C
4、酸序列的资料；(3)在生产C
8、C18等)或正相分子筛柱中启动和控制有关基因的测得IL—2主峰占95％以表达方法要有详细记录；(4)上；
产品纯化方法要有明确详 (3)氨苄青霉素测定：因为尽记载，如采用单抗法和层大肠杆菌发酵的基因工程析法，要采取适当措施，保产品均采用氨苄青霉素抗证这些单抗或其它潜在污性菌株生产，所以必须检定染物不损害终产品的质量氨苄青霉素残余量； 和安全性。 (4)残余DNA检测：采用同94．细胞因子的分子生物学位素探针法，每剂残余DNA测定法：
量不得超过100pg；
目前采用的分子生物学技 还有生物制品要求的常规术有RNA印迹法、核酸酶保实验检定，如热原质测定、护分析、原位杂交和多聚酶制剂水分测定、安全试验、链式反应。均为通过检测相急性毒性实验、无菌试验等应的mRNA量、推算出几量均必须合格。
的方法。多聚酶链式反应97．LAK细胞的杀肿瘤细胞(PCR)是目前检测几最敏感作用：LAK细胞杀伤肿瘤细的方法，尤其适用于极微量胞分如下三个阶段：
的标本，或仅有极少数细胞 (1)识别阶段：LAK细胞对才能表达几基因，或几基因正常细胞无损伤作用，而对以低水平表达的标本，目前肿瘤细胞结合进而杀伤，而已可作半定量分析，
且对多种肿瘤细胞结合而95．干扰素的定义及含义： 杀伤，说明多种肿瘤的细胞 (1)干扰素的定义：干扰素表面存在着共同抗原决定是一类在同种细胞上具有簇，可被LAK细胞所识别；广谱抗病毒活性的蛋白质，正常细胞表面可能不存在其活性的发挥又受细胞基肿瘤抗原决定簇，就不能被因组的调节和控制，涉及LAK细胞所杀伤；关于LAKRNA和蛋白质的合成； 细胞对肿瘤细胞结合分子 (2)目前认为，干扰素是一特性研究发现了“淋巴因子种类似多肽激素的细胞功活化细胞相关抗原”(LAA)，能的调节物质，是一种细胞而用LAA制备了单克隆抗素，这一定义的含义如下：体(KBA MoAb)可以抑制LAK①干扰素必须是一种蛋白细胞杀伤活性，提示了LAK质，它对蛋白酶类是敏感细胞杀伤肿瘤细胞的物质的，而对DNA酶或RNA酶却基础，从分子水平认识LAA有抵抗；天然干扰素是一种抗原为两条链的糖蛋白组糖蛋白，采用DNA重组技术成的二聚体，LAA只存在受由大肠杆菌表达的人干扰白介素—2激活后的细胞素多肽不带糖分子； ②这
表面，说明LAA是白介素—
的结果；
(2)杀伤阶段：LAK细胞杀伤肿瘤细胞主要是通过细胞介导的细胞毒作用对肿瘤细胞的杀伤；LAK细胞内含有溶细胞颗粒(C．C)，该颗粒中含有一种穿孔蛋白质，所谓穿孔因子(Peffoin)；LAK细胞与肿瘤细胞结合时，LAK细胞发生极化，首先高尔基体向与肿瘤细胞接触点方向移动，通过微管将颗粒分泌到两
种细胞接触面上，在Ca2+
激活下，LAK细胞也释放一种肿瘤坏死因子样毒素，对肿瘤细胞作用慢，不需Ca2+
，又称之为不依赖钙离子的杀伤作用，常常使肿瘤细胞DNA变性和细胞核裂解，从而抑制肿瘤细胞生长；
(3)裂解阶段：瘤细胞受到攻击后，经上述两阶段后，完成裂解，抑制肿瘤生长。 98．集落刺激因子的功能：
各种CSF的活性是以半固体培养基中CSF刺激造血细胞形成集落的能力来衡量的。其功能可分为四个方面：(1)刺激造血细胞增殖。集落形成细胞的分裂需要CSF持续存在，如从培养基中撤掉CSF，则细胞分裂停止，CSF的浓度决定细胞周期长短和产生子代细胞的总数目；(2)CSF既维系祖细胞的存活，也延长成熟细胞的寿命；(3)分化定型；(4)刺激终末细胞的功能活性。目前已知CSF能影响细胞作用、膜抗原的表达、吞噬作用、过氧化物的产生、杀伤微生物及肿瘤细胞，并产生许多重要的生物活性物质，如前列腺素E、肿瘤坏死因子、白细胞介素—
1、丫干扰素、血纤溶酶原活化因子等。
99．C—CSF和GM—CSF的异同点：
由于G—CSF和GM—CSF在许多相关的临床病例中可能有用，所以它们之间生物学特性差异，对某些疾病发病机理的认识有一定的意义；
(1)C—CSF特异性刺激中性白细胞，而GM—CSF则是所有粒细胞的总刺激因子，例如若要通过提高嗜酸性效应细胞水平来治疗寄生虫感染，则GM—CSF作用比G—CSF为好；
(2)GM—CSF是单核细胞和巨噬细胞的强激活剂，则G—CSF则不是，这种激活包括诱导产生诸如肿瘤坏死因子和IL—1类的其他自考现代生物制药技术
细胞因子，如需提高单核细胞和巨噬细胞活性，可选用CM—CSF，而不是C—CSF； 的主要部位，也是参与炎症的主要组织，内皮细胞本身也是产生细胞因子的重要
（另附：工艺流程图）
(3)CM—CSF是中性白细胞移动的强抑制剂，然而G—CSF则增强中性白细胞的移 动，例如当局部损伤时，GM—CSF可在局部产生，起弱的化学引诱剂作用，抑制炎症细胞离开炎症部位，而G—CSF则可增强炎症状细胞向炎症部位移动，这可能是两种造血生长因子共同提高宿主防御力的一种途径，在细菌性脓毒症时，接触内毒素可刺激单核细胞、巨噬细胞产生G—CSF，然后G—CSF刺激T细胞产生GM—CSF和IL—3，以增加骨髓内的骨髓细胞生成和进一步增强白细胞应答。 100．CSFs三种检测方法的特点：
(1)生物活性检测法，特点是灵敏、方便，但因造血前体细胞、依赖株细胞一般都受几种因子的影响，因此，该法不能明确因子的特性； 质产物合成；
(3)免疫学检测法，特点是特异、灵敏， 更高，缺点是不能证明有功能性蛋白缺点是不能证明被检CSF是否为具有 (2)分子生物学检测法，特点是敏感性完整生物活性结构的蛋白质而非变性蛋白质，因此检测时最好将
自考现代生物制药技术
名词概念
1、生物工程：应用生物科学的理论、方法、按照人们设计的蓝图，改良加工生物或用生物及其制备物作为加工原料，以提供所需生物制品为人类社会服务的综合性科学技术。
2、
51、植物细胞大规模培养：在人工控制下高密度大朗养有益植物细胞即植物细胞大规模培养。
52、半连续培养法：在反应器中投料和接种，培养尸段时间后，将培养液和新鲜培养液进行交换的培养方法，称为半连续培养法。
53、动物细胞工程：根据细胞生物学及工程学原理定向改造动物细胞遗传性、创造新物种，通过工程化为人类提供名贵药品服务的技术，称为动物细胞工程。
54、动物细胞培养技术：在一定条件下，通过人工供给营养物质及生长因子，使离体动物细胞或组织生长繁殖的方法，称为动物细胞培养技术。
55、细胞块培养法：将动物组织切成直径1-2mm小块，进行培养的方法，称为组织块培养法。
56、细胞单层培养法：动物组织块经消化分散成单个细胞或细胞团块后，粘附于培养容器表面培养成新生细胞单层的培养法，称为细胞单层培养法。
57、单细胞分离培养：动物组织分散后，将其单个细胞培养成纯系细胞集群的技术，称之为单细胞分离培养。
58、确立细胞株：正常细胞在移植继代过程中，有些细胞增殖力突然增强，在特定条件下可无限繁殖，与初代细胞相比，其形态、生理生化特性，病毒敏感性，抗原性及染色体结构均发生变化，具有致癌性，这些细胞称为确立细胞株。
59、动物体细胞杂交技术：在外力作用下，令两个或两个以上异源细胞合并为一个多核细胞的过程，称为动物体细胞杂交技术。 60、核体：细胞核连同其外表薄层细胞质构成的颗粒称为核体。 6
1、胞质体：不具有细胞核的细胞称为胞质体。 6
2、微核杂种细胞：按完整细胞之间的融合方式，将微核与另一完整细胞融合，使后者获得另一种细胞中的若于个染色体，所获融合子称为微核杂种细胞。 6
3、抗药性筛选系统：利用生物细胞对药物敏感性差异筛选杂种细胞的方法。 6
4、营养缺陷型细胞：在一些营养物质的合成能力上出现缺陷，因此必须在基本培养基中加入相应的有机成分才能正常生长的变异细胞。 6
5、营养互补选择法：利用两种亲本细胞营养互补作用原理筛选杂种细胞的方法称为营养互补选择法。 6
6、杂交瘤技术：骨髓瘤细胞与免疫淋巴细胞融合制备杂种细胞的方法为杂交瘤技术。 6
7、杂合瘤：骨髓瘤细胞与免疫淋巴细胞融合制备的杂种细胞称为杂合瘤。 68：微载体培养法；将细胞吸附于微载体表面的培养方法。 6
9、酶工程：应用酶的特异性催化功能并通过工程化为人类生产有用产品及提供有益服务的技术为酶工程。70、酶：生物体内具有特殊催化功能的蛋白质称为酶。7
1、固定化酶：限制或定位于特定空间位置的酶称为固定化酶。
7
2、固定化细胞：苹限制或定位于特定空间位置的细胞称为固定化细胞。 7
3、载体结合法：将细胞悬浮液直接与水不溶性载体相结合的固定化方法。 7
4、包埋法：将细胞定位于凝胶网格内的技术称为包埋法。 7
5、偶联效率：偶联固定化反应过程中载体结合蛋白质的能力称为偶联效率。 7
6、酶活力：酶类催化特定化学反应的能力称为酶活力。7
7、酶比活：指每毫克酶蛋白所表现的活力。 7
8、固定化反应的酶活力回收率：固定酶所显示的活力与加入偶联液中酶总活力的比值称为固定化反应的酶活力回收率。
79、酶试剂盒：将酶、反应试剂、稳定剂、激活剂、填充剂、及缓冲剂等配成检测用的混合制剂称酶试剂盒。80、细胞因子：是人类或动物的各类细胞分泌的具有多样生物活性因子，是可溶性物质，是一组不均一的蛋白质能调节细胞的生长与分化。 8
1、白介素细胞：邮包细胞或其它体细胞产生的又在细胞间起调节作用和介导作用的因子。 8
2、IL-3：即白细胞介素3，有激活的T淋巴细胞产生，能刺激多能造血干细胞和各系细胞的分化和增值，促进和维持肥大细胞的增值，增值中性粒细胞、酸性粒细胞的活性，促进NK细胞杀伤实体瘤的活性。
83、IL-10：由TH2细胞产生，能抑制TH1细胞合成细胞因子的能力，是一种糖蛋白。8
4、IL-12：是由B淋巴细胞分泌产生的一种细胞因子，分子量为75KD的糖蛋白，其主要作用是促进PHA活化的PBMC增殖自考现代生物制药技术
以及亚适剂量IL-2协同促进作用。 8
5、肿瘤坏死因子：是一种由巨噬细胞分泌能产生细胞毒，使肿瘤细胞溶解的因子。 8
6、干扰素：是一类在同种细胞上具有广谱抗病毒活性的蛋白质，其活性的发挥又受细胞基因组的调节与控制，涉及RNA和蛋白质的合成。
87、集落刺激因子：CSF为一组糖蛋白物质，由淋巴细胞和单核细胞自然产生，有刺激红细胞系以外造血细胞增殖和分化作用。 8
8、超诱导：是指细胞在某种大分子合成抑制物的适当作用下，诱生蛋白合成增加的现象。 8
9、生物反应调节剂：是生物体体内的某些细胞和某些分子，它们既是机体对内外环境刺激应答的效应机制，也是机体维持内环境的稳定因素。
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